一、腰椎相关结构的SP能神经支配（论文文献综述）
马骁[1]（2020）在《膈神经-迷走神经端侧吻合重建颈髓损伤大鼠膈肌功能的神经通路研究》文中指出研究目的:颈髓损伤常导致呼吸功能障碍,此类患者生活质量极低,具有很高的死亡率,目前缺乏有效的治疗手段。前期研究中,课题组通过膈神经-迷走神经端侧吻合重建了颈髓损伤大鼠的膈肌功能,但其机制尚不明确。本课题拟对神经移位前后支配膈肌的各级神经中枢进行比较,阐明神经移位后神经通路的变化,为今后的机制研究和临床治疗提供依据。研究方法:构建膈神经-迷走神经端侧吻合的大鼠模型,并通过C2离断试验对该模型重建呼吸功能的有效性进行验证;利用腺相关病毒AAV-Retro-GFP对正常大鼠的迷走神经、膈神经以及神经移位大鼠的吻合侧远端膈神经进行显微注射,明确神经移位前后支配膈肌的初级运动神经元。同样,我们将伪狂犬病毒PRV-CMV-EGFP分别注射正常大鼠的迷走神经、膈神经以及神经移位大鼠的吻合侧远端膈神经,利用其跨多突触逆行感染的特性,对神经移位前后支配膈肌的前运动神经和大脑皮层高级中枢进行定位。利用免疫组织化学染色和免疫组化双标对AAV和PRV标记的神经区域进行识别。通过比较正常大鼠和神经移位大鼠各级神经中枢的差异,明确新形成的神经通路,进而初步阐明神经移位重建膈肌功能的中枢机制。结果:（1）构建了膈神经-迷走神经端侧吻合大鼠的动物模型,C2脊髓离断后,吻合组大鼠的存活时间明显高于对照组,证明神经移位对重建呼吸功能是有效的。（2）正常大鼠支配迷走神经的初级神经元位于迷走神经运动背核、疑核;二级神经元位于对侧迷走神经运动背核、孤束核、三叉神经脊束核、中间网状核、巨细胞网状核腹侧部、中缝隐核、中缝苍白核、最后区以及部分肾上腺/去甲肾上腺素能神经元（A1/C1、A2/C2、C3、A5、A6）;大脑皮层高级中枢位于缘下回、外侧隔阂中间部、岛叶无颗粒细胞皮质、嗅结节、梨形皮质。（3）正常大鼠支配膈肌的初级运动神经元为于同侧颈髓C4-6的脊髓前角;二级运动神经元位于吻侧腹侧呼吸组、前包钦格复合体、面旁呼吸组、孤束核、最后区、三叉神经脊束核、中间网状核、中缝隐核、中缝苍白核、巨细胞网状核腹侧带以及肾上腺素/去甲肾上腺素能神经元（A1/C1、A2、C3、A5、A6）;大脑皮层高级中枢位于第一运动皮质、第二运动皮质、边缘前皮质、外侧隔阂中间部、岛叶无颗粒细胞皮质、无名质、岛叶颗粒细胞皮质。（4）膈神经-迷走神经端侧吻合后,支配膈肌的初级运动神经元位于迷走神经运动背核、疑核;二级运动神经元位于对侧迷走神经运动背核、孤束核、中缝隐核、中缝苍白核、最后区以及部分肾上腺/去甲肾上腺素能神经元（A1/C1、A2/C2、C3、A5、A6）;大脑皮层高级中枢位于缘下回、边缘前皮质、岛叶无颗粒细胞皮质、第二运动皮质、第一运动皮质、扣带皮质1区、外侧隔核中间部岛叶颗粒细胞皮质、杏仁梨形移行区/梨形皮质。研究结论:膈神经-迷走神经端侧吻合可以有效重建颈髓损伤大鼠的膈肌功能,神经移位术后,大脑皮层发生重塑,膈肌皮层高级中枢重新与膈肌恢复联系,形成了膈肌皮层高级中枢——迷走皮层高级中枢——迷走神经二级神经元——迷走神经初级神经元——迷走神经——膈神经——膈肌的神经通路,既保留了迷走神经通路自发放电产生自主呼吸的优势,又恢复了膈肌皮层高级中枢对膈肌的支配,实现对膈肌的随意控制。
赵晋莹[2]（2020）在《VIP/SP介导胃的特定穴配伍干预GU模型大鼠作用机制研究》文中研究表明目的运用新一代高敏感逆行示踪剂,在生理状态下,观察周围和中枢神经系统对足阳明胃经的原穴、络穴、合穴、俞穴、募穴以及胃的支配规律和关联性,从感觉、运动和自主神经系统三个方面来阐明胃与其相关特定穴之间的内在联系,为特定穴治疗脏腑病的机制奠定神经解剖学基础。以应激性胃溃疡模型大鼠为研究对象,运用免疫荧光化学染色法的方法,通过观察针刺合募配伍、原络配伍与俞募配伍干预胃溃疡模型大鼠后其胃组织的血管活性肠肽（VIP）和P物质（substance P,SP）的形态和功能变化,从分子水平上阐释特定穴配伍治疗胃溃疡的病理机制。为针灸在生理、病理状态下干预脏腑的作用机制奠定物质基础,为经穴脏腑相关性的研究提供了一种新的模式或方向,同时对针灸临床选用合理的配伍方案治疗相应脏腑疾病具有指导意义。方法第一部分:清洁级健康雄性Sprague Dawley大鼠18只,体质量（220±20）g,随机分为合穴-足三里与募穴-中脘;俞穴-胃俞与胃;原穴-冲阳与络穴-丰隆,每组6只。大鼠处于呼吸麻醉状态下,用微量注射器进行示踪剂的注射,将0.1%的AF488-CTB或AF594-CTB注射入相应六组大鼠“中脘”“胃俞”和左侧的“足三里”、“冲阳”、“丰隆”穴区皮下以及胃。示踪后2-3天,麻醉,心脏灌流。取出双侧交感神经链、颈胸腰部脊神经节、脊髓、脑干、迷走神经上下节。取下的组织放置于含4%多聚甲醛的固定液中后固定2-3 h,经0.1 mol/L PB清洗后,换到经含25%蔗糖的0.1 mol/L PB中脱水,放置于4℃冰箱中,待组织自然下沉。制作成切片标本,使用荧光显微镜或共聚焦显微镜对标记的相关神经元进行观察和记录。第二部分清洁级健康雄性Sprague Dawley大鼠30只,体质量（220±20）g,随机分为空白组A、模型组B、合募配穴组C、原络配穴组D和俞募配穴组E五个组,每组6只。大鼠处于呼吸麻醉状态下,进行电针,7天后,通过水浸-束缚法制造胃溃疡病理模型。麻醉,心脏灌流。取出胃,放置于含4%多聚甲醛的固定液中后固定2-3 h,换到含25%蔗糖的0.1 mol/L PB（pH7.4）中脱水,再放置于4℃冰箱中待组织自然下沉。用冰冻切片机将其制作成20μm厚的切片,贴敷于阳离子载玻片上,运用免疫荧光染色技术圈染VIP及SP,然后用荧光显微镜进行观察记录。结果第一部分:1.被AF594/488-CTB标记的与大鼠“胃”和左侧“胃俞”穴区相关的感觉神经元分别出现在T2-L4和T8-L2节段的DRG中,且集中在T8-L1节段。被AF488-CTB标记的支配“胃俞”穴区的运动神经元分别分布在T11-L3节段区域的脊髓左侧前角中。支配胃和“胃俞”穴区的交感节后神经元主要分布于左侧胸部交感神经链中。在迷走神经背核和迷走神经上下节中观察到被标记支配胃的神经元。2.被AF594/488-CTB标记的与“足三里”及“中脘”相关的感觉神经元分别出现在L3-L6和T6-T13节段的DRG中。支配“足三里”和“中脘”穴区的运动神经元分别分布在L3-L5和T8-T12节段区域的脊髓左侧前角中。支配“足三里”和“中脘”穴区的交感节后神经元主要分布于左侧腰部交感神经链中及下胸部交感神经链中。3.被AF594/488-CTB标记的与“丰隆”及“冲阳”相关的感觉神经元分别出现在L3-L6节段的DRG中。支配“丰隆”和“冲阳”穴区的运动神经元分别分布在L4-L6节段区域的脊髓左侧前角中。第二部分:1.模型组胃黏膜增厚,内壁泛红且多出存在黑、褐色大块出血点。合募配穴干预组胃黏膜微微增厚,内壁稍泛红且偶有出血点。原络配穴干预组胃黏膜微增厚,内壁呈粉红色且有多处出血点。俞募配穴干预组胃黏膜微微增厚,内壁稍泛红且偶有出血点。2.模型组大鼠胃壁内的VIP阳性神经纤维长度较空白组显着降低（P<0.01）。经针刺干预后,胃壁内的VIP阳性神经纤维长度也有不同程度的增加:其中,合募配穴干预组较模型组显着增加（P<0.01）,且接近于空白组（P<0.01）;俞募配穴干预组较模型组显着增加（P<0.01）,且接近于空白组（P>0.05）;原络配穴干预组较模型组有所增加,但无统计学差异（P>0.05）;原络配穴干预组较空白组有显着性差异（P<0.01）;合募配穴干预组较俞募配穴干预组无显着性差异（P>0.05）。合募配穴干预组较原络配穴干预组显着增加（P<0.05）。俞募配穴干预组较原络配穴干预组有所增加,但无统计学差异（P>0.05）。3.模型组大鼠胃壁内的SP阳性神经纤维长度较空白组显着增加（P<0.01）。经针刺干预后,胃壁内的SP阳性神经纤维长度也有不同程度的降低:其中,合募配穴干预组较模型组显着降低（P<0.01）,且接近于空白组（P>0.05）;俞募配穴干预组较模型组显着降低（P<0.01）,且接近于空白组（P>0.05）;原络配穴干预组较模型组显着降低（P<0.05）,但与空白组有显着性差异（P<0.01）;合募配穴干预组和俞募配穴干预组无显着性差异（P>0.05）。合募配穴干预组较原络配穴干预组显着降低（P<0.05）,俞募配穴干预组较原络配穴干预组显着降低（P<0.05）。结论1.在胃及其特定穴相关感觉支配方面,胃及其特定穴与胃均存在不同神经节段的重合。2.胃俞、足三里和中脘可通过交感神经的传导对胃起到不同程度的调节作用。3.针刺胃的特定穴不会通过运动传导途径对胃产生影响。4.生理状态下,俞募为胃的近神经节段配伍,可以从感觉、运动、交感等多种神经通路发挥其协同增效的作用。原络为胃的远神经节段配伍,可以通过对感觉、运动神经元的支配起到了协同增效的作用。合募为胃的远节段与近节段配伍,其可能是通过对高级中枢的刺激起到对胃的调节作用。5.病理状态下,合募、俞募、原络配伍可以通过调整胃组织内相关神经肽VIP/SP的分泌来对胃起到防治作用。且合募配穴效果最佳。
张楠[3]（2020）在《阿仑膦酸钠对卵巢切除后大鼠腰椎关节突关节退变的保护作用及其机制的研究》文中研究表明第一部分卵巢切除后大鼠腰椎关节突关节退变的动物模型研究目的:本实验应用大鼠卵巢切除（Ovariectomy,OVX）制作雌激素缺乏模型,研究雌激素缺乏FJ软骨及软骨下骨退变的特点及机制。方法:30只3月龄Sprague-Dawley（SD）大鼠,雌性,随机分3组:Normal组、Sham组、OVX组（每组各10只）。Sham组大鼠切开暴露卵巢,不切除即缝合关闭伤口,行假手术对照;OVX组行卵巢切除手术（去势手术）。12周后将全部大鼠行安乐死。选择脊柱L4-L5节段关节突关节取材处理后切片,甲苯胺蓝染色法观察FJ软骨的组织学变化,依据镜下所见评分。Micro-CT对脊柱L4-L5关节突关节的软骨下骨微结构进行扫描并分析其参数。腹主动脉血清CTX-1浓度用ELISA法进行测量分析。结果:显微镜下观察甲苯胺蓝染色后标本切片:Normal组及Sham组表现为表面光滑,无裂隙及磨损;软骨细胞排列整齐,数量正常;细胞外基质染色均匀,染色无变浅。OVX组关节软骨表面可见磨损及裂缝,严重部位裂缝深达中层软骨,软骨细胞数量减少并且排列失去正常规律。在组织学评分中,OVX组显着高于Normal组及Sham组（P<0.05）。ELISA检测的血清检测结果显示:与Normal组、Sham组相比,OVX组的血清中CTX-1升高（P<0.05）。Micro-CT扫描软骨下骨微结构并经过数据分析显示:与Normal组、Sham组相比,OVX组的BMD、BV/TV和Tb.Th降低（均为P<0.05）,但Tb.Sp增加（P<0.05）。两组间的Tb.N值无显着统计学差异（P>0.05）。第二部分阿仑膦酸钠对卵巢切除后大鼠腰椎关节突关节软骨退变的作用研究目的:本研究应用阿仑膦酸钠（alendronate,ALN）对卵巢切除后的去势大鼠模型进行皮下注射治疗,研究ALN对OVX大鼠腰椎FJ关节软骨的保护作用。方法:30只三月龄Sprague-Dawley（SD）大鼠,雌性,随机分为Control组、OVX+V组、OVX+ALN组（每组各10只）,Control组大鼠切开暴露卵巢,不切除即缝合关闭伤口,行假手术对照;OVX+V组、OVX+ALN组切除卵巢（去势手术）。术后OVX+ALN组70μg/kg皮下注射ALN,每周一次。OVX+V组大鼠进行皮下注射同剂量生理盐水。12周后所有大鼠进行安乐死。甲苯胺蓝染色观察去势大鼠脊柱L4-5 FJ软骨的组织学变化并根据镜下所见作出评分。免疫组化染色分析对OVX大鼠脊柱L4-5 FJ软骨中caspase-3、ADAMTS-4、MMP-13和AGG的表达。腹主动脉血清中COMP浓度用ELISA法分析。用相关分析法对血清COMP浓度与改良Mankin评分之间的相关性进行分析。结果:甲苯胺蓝染色镜下所见:Control组腰椎FJ软骨未见明显损伤,表面光滑,无裂隙及磨损;软骨细胞排列整齐,数量正常;细胞外基质染色均匀,染色无变浅。OVX+V组腰椎FJ软骨表面不规则和小裂隙为特征。OVX+ALN组在应用ALN注射后,OVX大鼠软骨损伤程度减轻,软骨细胞形态、排列及软骨细胞外基质染色较OVX+V组改善。OVX+V组改良Mankin评分明显高于Control组及OVX+ALN组（均P<0.05）。Control组与OVX+ALN组比较无显着性差异（P>0.05）。OVX+V组腰椎FJ软骨厚度明显小于Control组（P<0.05）。OVX+ALN组腰椎FJ软骨较OVX+V组明显增厚（P<0.001）,但OVX+ALN组与Control组无显着差异（P>0.05）。免疫组化检测后的数据显示:OVX+V组与Control组相比,aggrecan表达显着降低（P<0.01）,ADAMTS-4、MMP-13、caspase-3表达显着升高（P<0.001）。与OVX+V组相比,OVX+ALN组ADAMTS-4、MMP-13、caspase-3表达均显着降低（P<0.001）,aggrecan表达显着升高（P<0.05）。ELISA检测去势大鼠腹腔动脉血的结果显示OVX+V组血清COMP浓度明显高于Control组（P<0.01）。而OVX+ALN组与OVX+V组、Control组比较,血清COMP浓度无显着性差异（P>0.05）。血清COMP浓度与软骨厚度呈显着负相关（r=-0.380,P=0.038）。第三部分阿仑膦酸钠对卵巢切除后大鼠腰椎关节突关节软骨下骨退变的作用研究目的:本研究应用阿仑膦酸钠（alendronate,ALN）对卵巢切除后的去势大鼠模型进行皮下注射治疗,研究应用该药物对去势大鼠腰椎FJ的软骨下骨的作用。方法:30只三月龄Sprague-Dawley（SD）大鼠,雌性,随机分为Control组、OVX+V组、OVX+ALN组（每组各10只）,Control组大鼠切开暴露卵巢,但不切除即缝合关闭伤口,行假手术对照;OVX+V组、OVX+ALN组大鼠行卵巢切除手术（去势手术）。术后OVX+V组大鼠进行皮下注射生理盐水治疗。OVX+ALN组给予皮下注射ALN治疗,剂量为70μg/kg,每周一次。12周后对所有大鼠进行安乐死。应用micro-CT对脊柱L4-L5关节突关节的软骨下骨微结构进行扫描并对其参数进行分析。结果:经过Micro-CT扫描去势大鼠脊柱L4-L5软骨下骨微结构并经过数据分析显示:与Control组相比,OVX+V组BMD（P<0.001）、BV/TV（P<0.001）、Tb.Th显着降低（P<0.05）,Tb.Sp显着升高（P<0.001）。与OVX+V组相比,OVX+ALN组BMD、BV/TV、Tb.Th显着升高,Tb.Sp显着降低（均P<0.001）结论:1.SD大鼠去势术后12周,雌激素缺乏可以导致大鼠的腰椎FJ发生退变。FJ中的软骨及软骨下骨均出现退变。2.ALN对去势SD大鼠FJ软骨具有一定的保护作用,其作用机制可能与ALN维持软骨代谢平衡及抑制软骨细胞凋亡有关。此外,血清COMP可能具有预测FJ OA的潜力。2.ALN对去势SD大鼠FJ软骨下骨也具有保护作用,其作用机制可能与ALN降低软骨下骨骨重塑活跃程度,减弱软骨下骨的转换有关。
王涛[4]（2019）在《右美托咪定与布比卡因联合使用对犬股神经坐骨神经阻滞影响》文中提出右美托咪定作为α-2受体拮抗剂在小动物临床中常与其他麻醉药配合使用,但关于右美托咪定与局麻药联合用于犬股神经坐骨神经阻滞较少报道;先前在人医和大鼠中有关于右美托咪定与布比卡因联合进行神经阻滞的研究;因此本文对右美托咪定与布比卡因联合使用进行犬股神经坐骨神经阻滞,比较右美托咪定与布比卡因联合进行阻滞与单纯用布比卡因进行阻滞产生的阻滞效果及不同右美托咪定注射途径对布比卡因阻滞效果的影响。本试验选取6只健康混血种犬（雌雄各半）,年龄平均为1.42（1.0-2.0）岁,体重为4.90±0.88（3.8-6.0）kg之间,体况检查、血常规、血液生化、神经学检查和骨骼肌肉检查均正常;试验犬均选取右侧后肢进行试验,6只犬重复进行三次股神经坐骨神经阻滞,每次股神经坐骨神经阻滞间隔时间为一周,阻滞在全身麻醉下进行（丙泊酚诱导麻醉,异氟烷维持麻醉）,用超声引导进行阻滞。根据三次股神经坐骨神经阻滞中右美托咪定注射途径不同分为以下三组:（1）神经周注射右美托咪定组（DPN组）:神经周注射（右美托咪定+布比卡因）0.2mL/kg,肌内注射生理盐水0.2mL/kg;（2）肌内注射右美托咪定组（DIM组）:神经周注射布比卡因0.2mL/kg,肌内注射右美托咪定0.2mL/kg;（3）对照组（CON组）:神经周注射布比卡因0.2mL/kg,肌内注射生理盐水0.2mL/kg。肌内注射均在前肢臂三头肌进行。麻醉苏醒后10min开始评估股神经/隐神经支配区/腓总神经支配区、胫神经支配区感觉阻滞作用及运动阻滞作用（包括本体反射和行走能力）,每1Omin评估一次,直到阻滞肢完全恢复后2h为止,记录阻滞发生时间、阻滞总持续时间及完全阻滞持续时间。试验结果如下:所有犬在神经阻滞前,均有正常的感觉功能（所有犬感觉评分均为1）;在股神经/隐神经、腓总神经及胫神经支配区域,所有犬均产生完全阻滞作用。（1）在股神经/隐神经支配区域中,各组之间在感觉阻滞发生时间、阻滞总持续时间及完全阻滞持续时间上无明显差异（P>0.05）;（2）在腓总神经支配区域中,各组之间在感觉阻滞发生时间及完全阻滞持续时间上无明显差异（P>0.05）;在感觉阻滞总持续时间中,DPN组明显高于DIM组与CON组,且DPN组与CON组之间差异显着（P<0.05）,但DPN组与DIM组之间及DIM组与CON组之间无明显差异（P>0.05）:（3）在胫神经支配区域中,各组之间在感觉阻滞发生时间及完全阻滞持续时间中无明显差异（P>0.05）;在感觉阻滞总持续时间中,DPN组与CON组之间差异显着（P<0.05）,但DPN组与DIM组之间及DIM组与CON组之间无明显差异（P>0.05）。所有犬在神经阻滞前均有正常的运动功能且无共济失调反应（所有犬运动评分均为1）;（1）在本体反射阻滞中,所有犬均产生完全阻滞作用;各组之间在阻滞发生时间及完全阻滞持续时间中无明显差异（P>0.05）;在总的阻滞持续时间中,DPN组与CON组之间差异显着（P<0.05）,但DPN组与DIM组之间及DPN组与CON组之间无明显差异（P>0.05）;（2）在行走能力阻滞中,所有犬在阻滞后均能观察到共济失调反应（完全阻滞作用）。在阻滞发生时间及阻滞总持续时间中,各组之间无明显差异（P>0.05）。试验结果表明:（1）在犬股神经坐骨神经阻滞中,右美托咪定与布比卡因联合应用对降低阻滞发生时间,延长阻滞持续时间效果不明显;（2）神经周注射右美托咪定与肌内注射右美托咪定对布比卡因阻滞效果影响较小。
张帅帅[5]（2019）在《Transwell共培养体系中背根神经节对骨髓间充质干细胞的作用及其机制研究》文中研究表明【背景】严重创伤等引起的大段骨缺损的治疗一直是骨科临床上的难题。组织工程骨的迅速发展为大段骨缺损的治疗提供了一种可行的方案。然而,目前组织工程骨（TEB）并没有广泛应用于临床大段骨缺损的治疗,主要因为植入体内的组织工程骨缺乏血管和神经的支配,致使组织工程骨体内成骨效果不佳。课题组前期在动物实验研究中发现感觉神经束植入组织工程骨可以显着促进组织工程骨成骨。然而目前感觉神经促组织工程骨成骨的体外细胞学机制并不明确。【目的】1.探究感觉神经促进组织工程骨成骨的体外细胞学机制;2.探究共培养体系中背根神经节（DRG）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖分化的影响;3.探究共培养体系中DRG对BMSCs作用的内在机制。【方法】1.通过全骨髓冲洗贴壁培养法提取BMSCs,并从细胞形态、多向分化潜能、特异性CD分子三方面鉴定提取的BMSCs;2.Transwell共培养体系的构建。取新生SD大鼠背根神经节（DRG）与绿色荧光大鼠骨髓间充质干细胞BMSCs构建Transwell共培养体系。实验组为DRG与BMSCs Transwell共培养（可表示为DRG+BMSCs组）,DRG神经细胞位于Transwell小室内,BMSCs正常接种于6孔板内。对照组为BMSCs单独培养组（可表示为BMSCs组）;3.通过CCK8方法检测BMSCs增殖情况;通过茜素红、油红O、阿利辛蓝染色评估BMSCs成骨、成脂、成软骨三向分化的能力;4.通过克隆形成实验（CFU）检测BMSCs自我更新能力并通过RT-PCR实验检测BMSCs干性基因的表达以明确BMSCs干性是否增强;5.通过免疫荧光染色和Western blot方法检测自噬相关蛋白LC3的表达并采用透射电镜观察自噬小体的形成和数量探究细胞自噬的变化;6.采用Western blot方法检测BMSCs中AMPK/mTOR和AKT/mTOR信号通路的激活情况以确定本实验中介导自噬的信号通路;7.采用AMPK抑制剂Compound C阻断AMPK/mTOR通路。通过Western blot、免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3,通过透射电镜观察自噬小体的形成,比较加入Compound C前后共培养组自噬强度和干性基因表达的变化,以明确AMPK/mTOR信号通路对BMSCs自噬和干性基因表达的调节作用;8.采用神经激肽1受体（NKIR）抑制剂阿瑞匹坦阻断DRG产生的P物质（SP）对BMSCs的作用,通过Western blot检测共培养组自噬相关蛋白LC3的变化并通过RT-PCR检测其干性基因的变化,以明确共培养体系中DRG作用于BMSCs的细胞因子。【结果】1.BMSCs的鉴定。细胞形态学观察发现:P3代细胞形态为典型的纺锤形或梭形并含绿色荧光;茜素红染色、油红O染色、阿利辛蓝染色均为阳性;细胞表面低表达造血细胞表面的标志分子CD34（2.3±0.37%,n=5）、CD45（2.4±0.19%,n=5）以及髓系细胞标志CD11b/c（1.4±0.13%,n=5）,高表达间充质干细胞的标志之一CD90（99.6±0.24%,n=5）。因此,所培养的细胞为骨髓间充质干细胞,并且细胞纯度较高。2.共培养体系中BMSCs增殖和分化实验结果。（1）CCK8实验结果显示:Transwell共培养实验第2、4、6、8、10天,共培养组BMSCs CCK8检测的吸光度值均高于对照组BMSCs（P值<0.05）,即共培养组BMSCs增殖能力强于对照组BMSCs,其中共培养第8天时两组增殖能力差异最显着。CCK8实验说明DRG与BMSCs共培养可促进BMSCs增殖。（2）茜素红染色结果显示:成骨诱导14天后,共培养组BMSCs比对照组BMSCs所形成的钙结节面积更大而且颜色更深;油红O染色结果显示:成脂诱导24天后,共培养组BMSCs比对照组BMSCs组所形成的脂滴更加饱满,脂滴数量更多;阿利辛蓝染色结果显示:成软骨诱导20天后,共培养组BMSCs比对照组BMSCs所形成的软骨基质团更大更饱满。共培养组BMSCs成骨、成脂、成软骨能力均强于对照组BMSCs,即BMSCs三向分化潜能在与DRG共培养后得到维持或增强。3.CFU实验和干性基因RT-PCR结果。（1）CFU实验结果显示:共培养组BMSCs克隆形成率显着高于对照组BMSCs（P值<0.05）,即共培养组BMSCs克隆形成能力强于对照组BMSCs。（2）RT-PCR结果显示:共培养组BMSCs Sox2、Nanog、Oct4三种干性因子基因表达较对照组BMSCs均上调（P值<0.05）。DRG与BMSCs共培养可以增强BMSCs的细胞干性。4.BMSCs自噬检测结果。（1）激光共聚焦显微镜观察免疫荧光染色结果可见共培养组BMSCs中细胞自噬相关蛋白LC3的荧光强度强于对照组BMSCs。Image J荧光强度半定量分析发现:共培养组BMSCs细胞自噬相关蛋白LC3荧光强度平均OD值大于对照组BMSCs（P值<0.05）;（2）Western blot条带半定量分析显示,共培养组BMSCs其LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值大于对照组BMSCs（P值<0.05）;（3）透射电镜观察发现:共培养组BMSCs细胞自噬小体的形成数量显着多于对照组BMSCs。共培养组BMSCs自噬强度大于对照组BMSCs。5.Western blot检测AMPK/mTOR通路和AKT/mTOR通路。Western blot结果显示:与对照组BMSCs相比,共培养组BMSCs中AMPK/mTOR信号通路中P-AMPK表达上调且P-mTOR表达下调,而AKT/mTOR信号通路中P-AKT表达没有变化。共培养过程中BMSCs自噬的增强伴随着AMPK/mTOR信号通路激活,而AKT/mTOR信号通路无明显变化。6.AMPK阻断实验。Compound C抑制AMPK的激活,阻断AMPK/mTOR信号通路的传导后,（1）Western blot结果显示:DRG+BMSCs+Compound C组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ表达量以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均小于DRG+BMSCs组（P值<0.05）,大于对照组（P值<0.05）。（2）RT-PCR结果显示:DRG+BMSCs+Compound C组Sox2、Nanog、Oct4三种干性基因的表达量小于DRG+BMSCs组（P值<0.05）,大于对照组（P值<0.05）。（3）透射电镜观察发现DRG+BMSCs+Compound C组自噬小体形成数量明显少于DRG+BMSCs组,多于对照组。AMPK特异性抑制剂Compound C可以显着降低共培养组中BMSCs的自噬水平以及干性基因的表达,AMPK/mTOR信号通路的激活介导了共培养体系中BMSCs自噬水平的增强。同时,本实验中DRG+BMSCs+Compound C组干性基因表达水平显着低于DRG+BMSCs共培养组进一步证明了自噬增强介导了共培养组BMSCs细胞干性的增强。7.NK1R抑制实验。NK1R特异性抑制剂阿瑞匹坦加入共培养体系后,（1）Western blot结果显示:DRG+BMSCs+aprepitant组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值较DRG+BMSCs组显着下降（P值<0.05）,但仍高于对照组（P值<0.05）。（2）RT-PCR结果显示:DRG+BMSCs+aprepitant组干性基因的表达水平较DRG+BMSCs组显着下降（P值<0.05）,但高于对照组（P值<0.05）。DRG来源的SP对于BMSCs自噬水平升高以及干性基因表达的上调具有重要作用。【结论】DRG和BMSCs组成的Transwell共培养体系中,DRG可通过激活AMPK/mTOR通路促进BMSCs自噬水平增强,进而维持或增强BMSCs的干性。在这一过程中,DRG产生的感觉神经肽SP起到重要作用。本研究对于揭示感觉神经促组织工程骨成骨体外细胞学机制具有重要意义。
何亮亮,倪家骧[6]（2017）在《盘源性疼痛研究进展》文中研究说明疼痛源自椎间盘自身,定义为盘源性疼痛,其疼痛范围弥散、部位深在、性质多以酸痛或胀痛为主,发病机制主要与椎间盘内神经末梢受到盘内高压或化学性伤害刺激的激惹有关。本文对盘源性疼痛的概念、解剖基础、发病机制、疼痛特点、诊断进行初步阐释,旨在为盘源性疼痛的诊断和治疗提供具有指导价值的参考信息,同时为建立和完善盘源性疼痛的诊断标准提出新的研究方向和目标。
徐庆平,徐聪,吴炳华,尹生江[7]（2017）在《小关节源性腰痛的研究进展》文中指出腰痛（low back pain,LBP）在骨科门诊中是非常常见的症状,并已成为引起劳动力丧失的一个主要因素,给社会经济带来了巨大负担[1、2]。由于导致腰痛的原因复杂,以往的研究主要集中在椎间盘,而小关节病变引起腰痛的机制研究却很少报道。随着CT和MRI等检查方法的进步及各种微创技术的发展,小关节源性腰痛（lumbar facet joint pain）也越来越引起大家的关注。有文献报道[4],15%52%
唐峰,谢宁[8]（2015）在《颈椎小关节源性疼痛机制的神经生物学研究进展》文中提出颈椎小关节疾病是颈部慢性疼痛的常见来源,临床上较为关注其诊断的精确性和稳定性,而对病理生理及疼痛机制,特别是相关神经生物学研究缺乏足够的认识。该文从疼痛产生的细胞学水平层面对颈椎小关节源性疼痛这一由多种炎性因子及神经递质参与调节及维持的综合反应进行综述:介绍颈椎小关节神经支配及其疼痛感受器的分布情况,阐述慢性损伤后小关节发生的不可逆的神经病理变化（包括神经元激活、炎性因子释放和神经元免疫表型改变等）,并重点介绍其中参与疼痛启动与维持的疼痛传入递质、应激相关蛋白和局部炎性因子、脊髓谷氨酸等三大类神经递质和肽类。
龚凯[9]（2010）在《小关节源性腰痛的基础及临床研究》文中指出下腰痛是指一组以腰骶部、骶髂、臀部疼痛为主要症状的综合症,可伴有下肢放射痛,麻木及无力等其他症状。国外的研究表明正常人群中约有60%-80%的成人在日常生活中有过一次及以上的下腰痛经历。在欧美国家下腰痛是45岁以下人群最常见的致残原因,随着人口老年化的进程其发病率还在逐年上升。在国内,下腰痛是骨科、运动康复医学及疼痛诊疗最常见的疾患,占日常门诊量的1/3;是仅次于上呼吸道感染而就诊的第二位常见原因。现今下腰痛已不再是单纯的医学问题,而是能引发一系列心理及社会经济负担的复杂难题。Waddell指出“医学的发展并没有解决下腰痛问题,甚至使其恶化,下腰痛是20世纪医疗卫生的灾难和未解之谜团”。下腰痛的产生是多因素的。以往关于下腰痛的研究主要集中在椎间盘源性疼痛。然而随着研究的深入,腰椎小关节疾病引起的疼痛逐渐引起人们的重视。本课题拟通过单关节腔内注射完全弗氏佐剂及碘乙酸钠建立腰椎小关节源性疼痛动物模型,初步探讨腰椎小关节源性疼痛的相关机制,为进一部研究腰椎小关节源性疼痛的机制及相关治疗提供实验平台,此外本课题还针对两种导致下腰痛的腰椎小关节疾病进行长期随访回顾性对比研究,以期能更好的了解腰椎小关节病变所致下腰痛的临床特点及治疗方法。第一部分SD大鼠腰椎小关节源性疼痛模型的建立及相关研究1. SD大鼠腰椎小关节P能神经纤维分布的初步研究目的:探讨P能神经纤维在SD大鼠腰椎小关节各组织结构中分布情况。方法:采用病理切片及免疫组织化学染色的方法研究P能神经纤维在SD大鼠腰椎小关节关节软骨,滑膜皱襞及软骨下骨中的分布情况。结果:P物质染色阳性神经纤维免疫染色呈迂曲条索状无髓纤维,直径1-5μm,在大鼠腰椎小关节关节囊,滑膜皱襞,软骨下骨及骨髓腔内均有分布,其中以关节囊分布密度较大。结论: P能神经纤维在SD大鼠腰椎小关节各组织结构中均有分布,是腰椎小关节源性疼痛来源的解剖学基础。2. SD大鼠腰椎小关节感觉传入纤维节段分布及传入神经元特点的相关研究目的:研究SD大鼠腰椎小关节感觉传入纤维节段分布规律及背根神经节中相应初级感觉传入神经元形态学及功能特点。方法:采用快蓝逆行标记SD大鼠同侧各节段背根神经节中腰椎小关节感觉传入神经元的节段分布规律,通过复合核黄逆行标记及P物质免疫荧光染色等双标的方法研究腰椎小关节初级感觉神经元的分支分布及功能特点。结果:SD大鼠腰5/6关节接受腰1至5节段支配,其中又以腰3至腰5节段支配为主;感觉传入神经元以中小型神经元为主,各节段背根节中均存在P物质/快蓝双标神经元,少量腰椎小关节初级感觉传入神经元有分支支配同侧下肢足底感觉。结论:SD大鼠接受多节段神经纤维支配,及其初级感觉传入神经元的形态学及功能特点可能造成是腰椎小关节源性腰痛及下肢牵涉痛的解剖基础。3.关节腔内注射弗氏佐剂诱导SD大鼠腰椎小关节炎性疼痛模型的建立目的:建立SD大鼠腰椎小关节炎性疼痛模型并对其疼痛机制进行初步研究。方法:采用单关节腔内显微注射完全弗氏佐剂诱导建立SD大鼠腰椎小关节炎性疼痛模型后,测量术后不同时间点大鼠同侧肢体足底机械痛及辐射热痛阈值变化,对关节软骨退变程度及滑膜炎性反应进行评估,测量背根神经节P物质含量、脊髓中P物质及GFAP含量变化情况,并观察塞来考昔对大鼠术后机械痛阈的影响。结果:单关节腔内注射完全弗氏佐剂后,大鼠关节软骨出现轻微度退变,滑膜炎性反应持续较长时间,术后直接测量并观察到大鼠同侧肢体足底机械痛及辐射热痛阈值出现降低,脊髓及背根节中P物质含量上升,脊髓背角星形胶质细胞增多,而塞来考昔术后可有效抑制术后大鼠机械痛阈变化。结论:利用关节腔内注射完全弗氏佐剂可成功诱导大鼠单关节炎性疼痛模型,疼痛产生的机制可能与滑膜炎性反应有关。4.关节腔内注射碘乙酸钠诱导大鼠腰椎小关节骨性关节炎伴疼痛模型的建立目的:建立SD大鼠腰椎小关节骨性关节炎伴疼痛模型并对其疼痛机制进行初步探讨。方法:采用单关节腔内显微注射不同浓度碘乙酸钠诱导建立SD大鼠腰椎小关节骨性关节炎模型后,测量术后不同时间点大鼠同侧肢体足底机械痛及辐射热痛阈值变化,对关节软骨退变程度行染色评估。依据术后疼痛行为学变化及软骨退变情况选择碘乙酸钠最适造模浓度。与术后不同时间点性关节及滑膜HE染色,采用ELSIA法测定术后滑膜炎性因子含量变化,免疫荧光染色计数背根神经节中P物质阳性细胞及ATF-3阳性细胞,并观察塞来考昔与加巴喷丁对大鼠术后机械痛阈的影响。结果:关节腔内注射碘乙酸钠后,大鼠关节出现明显骨性关节样病理改变,并随时间推移逐步加重。选取最适造模浓度为碘乙酸钠0.1mg/5μL。术后滑膜出现短暂性炎症反应,与早期术后机械痛及热痛阈值变化规律吻合,晚期关节结构出现明显破坏,软骨下骨暴露,伴随有机械痛及热痛阈值持续下降,各时间点背根节P物质变化规律与疼痛阈值变化规律吻合,背根节中早期无明显ATF-3表达,晚期其表达增加,抗炎药物早期镇痛效应明显,中晚期失效,加巴喷丁不同时间点镇痛效应均存在。结论:采用关节腔内注射碘乙酸钠可成功诱导大鼠腰椎小关节骨性关节炎伴疼痛模型,疼痛产生的机制可能有炎性因素及关节结构因素共同参与。第二部分、腰椎小关节滑膜囊肿与出血性滑膜囊肿诊疗的回顾性对比研究目的:探讨两种腰椎小关节囊肿的流行病学资料,临床表现及手术疗效的不同特点。方法:通过长期随访及回顾性分析,对比研究我科住院治疗的18例腰椎小关节滑膜囊肿及5例腰椎小关节出血性滑膜囊肿患者的流行病学资料,临床表现及手术疗效。结果:与腰椎滑膜囊肿相比,腰椎出血性滑膜囊肿平均发病年龄低,病程短,多有诱发因素,下肢放射痛症状严重,保守治疗通常无效;但两组患者在性别比,病变部位及伴随病变等方面无明显差异。两组患者经椎板开窗减压,囊肿切除,囊肿侧关节突关节内侧1/3切除术治疗后术前疼痛明显缓解,疗效满意,术后并发症发生率低,无腰椎不稳及复发报道。结论:腰椎出血性滑膜囊肿有其特定的临床表现,手术切除是针对腰椎小关节滑膜囊肿与出血性滑膜囊肿的安全有效治疗手段。第三部分、经骶骨椎体间钛笼植入原位融合与复位后经椎间孔椎体间自体髂骨融合治疗腰骶部Ⅱ度峡部裂性滑脱疗效的对比研究目的:对经骶骨椎体间钛笼植入原位融合与复位后经椎间孔椎体间自体髂骨融合两种不同术式治疗腰骶部Ⅱ度峡部裂性滑脱的疗效进行对比研究。方法:依据手术方式不同将34例患者分为两组,A组采用术式为后路减压复位,经椎间孔椎体间自体髂骨移植及后路短节段固定,共21例,B组采用术式为后路减压,经骶骨椎体间钛笼植入原位融合组及后路短节段固定,共13例。疗效评价指标包括:手术时间、术中出血,住院天数,术前术后腰腿痛VAS评分、ODI评分变化。影像学评价指标包括:骨性融合率,滑脱复位及丢失率,腰椎前凸角及腰骶角度数变化。结果:B组术式手术时间及术中出血少于A组。骨性融合率A组为95.2%,B组为93.2%。两组患者术后原有症状均得到明显改善,腰腿痛VAS评分及ODI评分明显降低,术前及术后腰椎前凸角及腰骶角较术前增加,但组间比较均无明显统计学差异。A组共3例患者出现术后并发症,其中2例供骨区疼痛,1例表浅感染,1例术后6月出现螺钉松动;B组共5例患者出现手术并发症,其中术中硬脊膜撕裂2例,术后一过性骶1神经根感觉障碍2例,短暂性踇长伸肌无力1例。结论:针对椎间隙明显塌陷并骨质疏松的腰骶椎峡部裂滑脱患者,经骶骨椎体间钛笼植入原位融合也是以一种可供选择的有效治疗手段。其中期疗效堪比TLIF术式,但神经功能损害并发症发生率相对略高。
敖建华[10]（2010）在《6-羟多巴胺诱导的去交感神经支配对大鼠骨代谢的影响》文中研究指明骨结构在人的一生中不停的改建并接受各种系统性和局部性因子的调节。最近的组织化学和药理学研究发现神经系统参与骨代谢的调控,其调控由成骨细胞和破骨细胞来媒介的,同时发现人成骨细胞和破骨细胞胞膜上有多种肾上腺素受体和神经肽受体,表明外周交感神经和感觉神经元通过与成骨细胞和破骨细胞的突触接触来动态的局部调控骨的代谢。目前大量的离体和活体实验已经证实交感神经系统参与骨代谢的调控,交感神经系统可以通过对成骨细胞及破骨细胞的调节而间接影响到骨组织代谢。近期的研究表明交感神经及外周感觉神经轴突向成骨细胞及破骨细胞延伸是受到局部骨代谢的动态神经调节。骨膜受到有髓鞘与无髓鞘的感觉神经纤维支配。这两种神经纤维均能释放出降钙素基因相关肽（CGRP）与P物质（SP）。而降钙素基因相关肽（CGRP）与P物质（SP）已经被证实直接和/或间接调节成骨细胞与破骨细胞[1-7]。而交感神经对骨代谢影响的机制尚未完全阐明。6-羟多巴胺是一种常被用来选择性地杀死多巴胺和去甲肾上腺素神经元的一种神经毒素。作为一种神经毒剂,6-羟多巴胺可以选择性破坏交感神经末梢。同时,在外周应用时不经过血脑屏障,并破坏外周交感神经轴索纤维,是目前一种公认的交感神经化学切除剂[8-9]。在本研究中,我们采用了三种不同剂量的6-羟多巴胺来选择性的破坏成年大鼠的交感神经纤维,通过μCT扫描观察骨量和结构的变化,采用RT-PCR技术检测mRNA表达水平,采用生物材料力学指标检测骨强度的变化,血浆生化学ELISA分析骨细胞代谢活性标记物含量的变化以及组织学检查来观6-羟多巴胺诱导的交感神经切除对骨代谢的影响。材料方法32只8周龄雄性Wistar大鼠被随机分成4组,对照组和三种不同剂量6 -羟多巴胺治疗组（100mg/kg,200mg/kg和300mg/kg）,每组8只,6 -羟多巴胺和溶剂（对照组）连续5天在大鼠腹腔内注射,4周后所有动物经腹动脉放血处死,处死前13天和3天前分别腹腔注射四环素和钙黄素。胫骨、股骨、第6腰椎和血浆标本取材。右侧胫骨的近中骨骺端行μCT扫描,在图形工作站上去除皮质骨的影像,进行海绵状骨三维结构重建,计算出相对海绵状骨骨体积分数（BV/TV）,骨小梁数量（Tb.N）,骨小梁厚度（Tb.Th）和骨小梁分离度（Tb.Sp）。右侧胫骨的近中骨骺端标本μCT扫描后脱水,树脂包埋,制作不脱钙组织切片,在荧光显微镜下观察,测量四环素和钙黄素荧光带的间距,计算骨矿化沉积率[mineral appositional rate,MAR（μm /d）]。左侧股骨和第6腰椎椎体分别进行三点弯曲和压缩实验,计算骨的生物材料力学参数。左侧股骨和第6腰椎取材后-20℃生理盐水保存,解冻后,分离第6腰椎椎体并磨除两端骨质形成柱状体结构,使用电脑控制的材料力学分析仪进行第6腰椎椎体压缩实验,椎体置于载物台上,连接传感器的压缩杆以1mm/分的速度压迫椎体直至变形;股骨至于间距20mm的两金属杆顶端,进行三点弯曲实验,压缩杆以10mm/分压迫股骨中段部直至折断。计算机自动记录压力-挠度曲线,得出骨的四个生物材料力学参数:强度、延展性、韧性和弹性模量。从右侧股骨近中骨骺端提取mRNA,并使用RT-PCR技术检测细胞核因子κB受体活化因子配基（Ligand of receptor activator of NFκB,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）的表达,进行定量分析。RANKL、OPG是成骨细胞正常的分泌分子,RANKL主要作用是刺激破骨细胞的分化,增强成熟破骨细胞的活性并且抑制其凋亡,OPG作为RANKL的诱骗受体竞争性抑制RANKL的作用,从而抑制破骨细胞的形成和功能。RANKL/OPG的相对水平是决定破骨细胞形成及其活性大小的关键因素。应用ELISA检测血浆中的成骨细胞活性标记物骨钙素（Osteocalcin）和破骨细胞活性标记物抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRAP 5b）的含量。大鼠腹动脉血置于干燥管离心取血浆保存于-80℃冰箱,解冻后,按照大鼠骨钙素（Rat Osteocalcin）ELISA试剂盒和大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b（Rat TRAP 5b） ELISA试剂盒说明书实验步骤检测血浆中骨钙素和抗酒石酸酸性磷酸酶5b的含量。骨钙素是由成骨细胞分泌的一种活性多肽,在调节骨钙代谢中起着重要作用,是研究骨代谢的一项新的生化标志物。TRAP是破骨细胞骨吸收中表达并被释放进入血循环,TRAP被认为是有效测定骨吸收速率的潜在标记物。左侧胫骨的近中骨骺端标本甲醛固定48h,20% EDTA脱钙三周,脱水,石蜡包埋,制作石蜡切片,行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色,光镜观察,组织形态测定法来测定破骨细胞数目（Oc.N/BS）和骨吸收表面积（Oc.S/BS）。结果μCT扫描结果显示大剂量6-羟多巴胺（300mg/kg）组胫骨近心骨骺端海绵骨体积分数（BV/TV）明显增加,骨小梁分离度（Tb.Sp）明显缩小,BV/TV较对照组增加18.9%（P<0.05）,Tb.Sp减少13% （P<0.05）。第6腰椎椎体压缩实验显示大剂量6-羟多巴胺（300mg/kg）组骨生物材料力学参数如强度、延展性和韧性分别较对照组增加19.7%（P<0.01）, 28.7%（P<0.05）和40.4%（P<0.05）。股骨三点弯曲实验结果显示各项生物材料力学参数在实验组和对照组之间无显着差异（P>0.05）。RT-PCR检测显示各剂量组与对照组比较骨保护素（OPG）的表达无显着差异（P>0.05）,而大剂量6-羟多巴胺（300mg/kg）组中细胞核因子κB受体活化因子配基（RANKL）的表达较对照组显着减少27%（P<0.05）。血浆中骨钙素（Osteocalcin）的含量各剂量组与对照组之间无显着差异（P>0.05）,在大剂量6-羟多巴胺（300mg/kg）组中抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRAP 5b）的含量与对照组比较显着减少50.3%（P<0.05）。组织形态测定法测定中等剂量组（200mg/kg）和大剂量6-羟多巴胺（300mg/kg）组破骨细胞数目（Oc.N/BS）较对照组分别显着减少45%（P<0.01）和70%（P<0.01）;骨吸收表面积（Oc.S/BS）分别显着减少25%（P<0.01）和37%（P<0.01）。结论本实验结果显示6-羟多巴胺诱导的交感神经切除可以抑制骨吸收,但对骨生成没有影响,证实交感神经支配参与骨代谢的调节。6-羟多巴胺抑制骨吸收的作用主要发生在大剂量组,小剂量组对骨的代谢无影响,中等剂量组破骨细胞数量和骨吸收表面积显着减少但骨量没有显着变化。6-羟多巴胺抑制骨吸收可能是通过调节破骨细胞数量及活性完成的,对成骨细胞没有影响。
二、腰椎相关结构的SP能神经支配（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、腰椎相关结构的SP能神经支配（论文提纲范文）
（1）膈神经-迷走神经端侧吻合重建颈髓损伤大鼠膈肌功能的神经通路研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第一章 前言 |
| 一、颈脊髓损伤 |
| 二、呼吸功能的神经支配 |
| 三、神经移位术在神经修复中的应用 |
| 四、示踪病毒的应用 |
| 五、实验目的 |
| 第二章 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 第三章 结果 |
| 一、膈神经-迷走神经端侧吻合大鼠模型的构建及有效性验证 |
| 二、正常SD大鼠迷走神经的神经通路 |
| 三、神经移位前SD大鼠支配膈肌的神经通路 |
| 四、神经移位后SD大鼠支配膈肌的神经通路 |
| 第四章 讨论 |
| 一、膈神经-迷走神经端侧吻合重建颈髓损伤大鼠膈肌功能的动物模型 |
| 二、神经移位前后膈肌初级运动神经元的比较 |
| 三、神经移位前后膈肌二级运动神经元的比较 |
| 四、神经移位后大脑皮层高级中枢的重塑 |
| 第五章 结论与展望 |
| 一、结论 |
| 二、下一步研究方向 |
| 参考文献 |
| 附录 综述:脊髓损伤与控制呼吸的中枢神经网络 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况 |
| 致谢 |
（2）VIP/SP介导胃的特定穴配伍干预GU模型大鼠作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 综述一 逆行示踪技术在针灸研究中的应用概况 |
| 综述二 胃溃疡的发病机制及治疗研究进展 |
| 实验研究 |
| 第一章 周围和中枢神经系统对足阳明胃经的原穴、络穴、合穴、俞穴、募穴以及胃的支配规律和关联性 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 针刺干预GU模型大鼠胃组织VIP/SP的分布特征 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（3）阿仑膦酸钠对卵巢切除后大鼠腰椎关节突关节退变的保护作用及其机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 卵巢切除后大鼠腰椎关节突关节退变的实验模型研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 阿仑膦酸钠对卵巢切除后大鼠腰椎关节突关节软骨退变的作用研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 阿仑膦酸钠对卵巢切除后大鼠腰椎关节突关节软骨下骨退变的作用研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 从腰椎小关节的生物力学理解下腰痛的发生 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）右美托咪定与布比卡因联合使用对犬股神经坐骨神经阻滞影响（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩写与符号清单 |
| 文献综述 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 一般资料 |
| 1.1.2 试验器材仪器及药品 |
| 1.2 试验方法与分组 |
| 1.3 生物统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 麻醉监护 |
| 2.2 感觉与运动阻滞作用 |
| 2.2.1 感觉阻滞作用 |
| 2.2.2 运动阻滞作用 |
| 3 讨论 |
| 3.1 股神经/坐骨神经阻滞方法的探讨 |
| 3.2 感觉与运动阻滞发生时间的探讨 |
| 3.3 感觉阻滞持续时间的探讨 |
| 3.4 运动阻滞持续时间探讨 |
| 3.5 右美托咪定不同注射途径对阻滞持续时间影响探讨 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
（5）Transwell共培养体系中背根神经节对骨髓间充质干细胞的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 1.组织工程骨研究现状和制约因素 |
| 2.周围神经(尤其是感觉神经和交感神经)对骨组织生理病理过程的影响 |
| 3.感觉神经和交感神经在软骨生理和发育中的作用 |
| 4.感觉神经和交感神经在骨关节炎病理中的作用 |
| 5.骨组织中感觉神经和交感神经的支配 |
| 6.骨组织中感觉神经肽和儿茶酚胺及其受体对骨重建及骨代谢的作用 |
| 7.本课题组前期的研究基础 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器和器械 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 PCR引物 |
| 2 方法 |
| 2.1 GFP大鼠BMSCs的分离提取培养 |
| 2.2 SD大鼠籽鼠DRG的提取与处理 |
| 2.3 DRG与 GFP-BMSCs共培养的方法 |
| 2.4 流式细胞检测 |
| 2.5 BMSCs成骨诱导及茜素红染色 |
| 2.6 BMSCs成脂诱导和油红O染色 |
| 2.7 BMSCs成软骨诱导和阿利辛蓝染色 |
| 2.8 CCK8 检测细胞增殖 |
| 2.9 克隆形成实验(CFU) |
| 2.10 RT-PCR |
| 2.11 蛋白电泳检测(Western blot) |
| 2.12 免疫荧光染色及观察 |
| 2.13 透射电镜观察自噬变化 |
| 2.14 药物处理 |
| 2.15 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 绿色荧光BMSCs和背根神经节细胞的培养 |
| 3.2 GFP-BMSCs的鉴定 |
| 3.3 DRG与 BMSCs共培养对BMSCs黏附的影响 |
| 3.4 DRG与 BMSCs共培养促进BMSCs的增殖和三向分化潜能的维持 |
| 3.5 DRG与 BMSCs共培养促进BMSCs的克隆形成能力和干性基因的表达 |
| 3.6 DRG与 BMSCs共培养可提高BMSCs的自噬水平 |
| 3.7 共培养过程中BMSCs内 AMPK/mTOR信号通路被激活 |
| 3.8 Compound C可降低共培养体系中BMSCs的自噬水平和干性基因的表达量 |
| 3.9 Compound C单独作用对BMSCs自噬和干性基因表达无影响 |
| 3.10 NK1R特异性抑制剂阿瑞匹坦可降低共培养体系中BMSCs的自噬水平和干性基因表达量 |
| 4 讨论 |
| 4.1 共培养体系中DRG促进BMSCs的增殖与三向分化潜能的维持 |
| 4.2 共培养体系中BMSCs除成骨、成脂、成软骨分化潜能增强外,其他方向分化潜能也可能增强 |
| 4.3 共培养体系中DRG通过增强BMSCs自噬水平维持BMSCs干性 |
| 4.4 共培养体系中AMPK/mTOR信号通路介导了BMSCs自噬增强 |
| 4.5 共培养体系中DRG分泌的SP对 BMSCs自噬和干性维持起到重要作用 |
| 4.6 BMSCs旁分泌功能及共培养体系的中DRG与 BMSCs动态相互作用的观点 |
| 4.7 本研究对于组织工程骨构建的意义 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究成果 |
| 致谢 |
（6）盘源性疼痛研究进展（论文提纲范文）
| 1 盘源性疼痛概念的提出 |
| 2 盘源性疼痛的解剖基础 |
| 2.1 椎间盘内神经分布规律 |
| 2.2 椎间盘内神经类型 |
| 2.3 椎间盘内神经来源 |
| 3 盘源性疼痛的发病机制 |
| 3.1 会聚投射学说[27] |
| 3.2 会聚易化学说[27] |
| 3.3 外周神经分支学说[27-28] |
| 3.4 感觉-交感反射学说[27, 29] |
| 3.5 感觉-运动反射学说[30] |
| 4 盘源性疼痛的疼痛特点 |
| 4.1 弥散性 |
| 4.2 局限性 |
| 4.3 重叠性 |
| 4.4 趋势性 |
| 4.5 方向性 |
| 4.6 多节段性 |
| 5 盘源性疼痛的诊断 |
| 5.1 症状性诊断[2] |
| 5.1.1 颈椎盘源性疼痛 |
| 5.1.2 腰椎盘源性疼痛 |
| 5.2 体格检查诊断 |
| 5.3 排他性诊断 |
| 5.3.1 颈椎盘源性疼痛的排他性诊断 |
| 5.3.2 腰椎间盘源性疼痛的排他性诊断 |
| 5.4 MRI检查 |
| 5.5 椎间盘造影术 |
（7）小关节源性腰痛的研究进展（论文提纲范文）
| 1 历史背景 |
| 2 小关节源性腰痛的发病机制 |
| 2.1 腰椎小关节的神经支配和疼痛相关模式 |
| 2.2 腰椎小关节的解剖与生物力学因素 |
| 2.3 炎症因子 |
| 2.4 小关节矢状位不对性和方向性 |
| 3 总结与展望 |
（8）颈椎小关节源性疼痛机制的神经生物学研究进展（论文提纲范文）
| 1 颈椎小关节源性疼痛的解剖学基础 |
| 1.1 颈椎小关节的神经支配 |
| 1.2 颈椎小关节疼痛感受器分布 |
| 2 颈椎小关节源性疼痛机制的神经生物学研究 |
| 2.1 介导疼痛传递和调节的物质 |
| 2.2 应激相关蛋白和局部炎性因子 |
| 2.3 脊髓谷氨酸能系统 |
| 3 小结 |
（9）小关节源性腰痛的基础及临床研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 SD大鼠腰椎小关节源性疼痛模型的建立及相关研究 |
| 实验一、SD大鼠腰椎小关节P能神经纤维分布的初步研究 |
| 实验二、SD大鼠腰椎小关节神经支配的节段分布规律及背根神经节中传入神经元特点的相关研究 |
| 实验三、单关节腔内注射弗氏佐剂诱导大鼠腰椎小关节炎性疼痛模型的建立及初步研究 |
| 实验四、单关节腔内注射碘乙酸钠诱导大鼠腰椎小关节骨性关节炎伴疼痛模型的建立及初步研究 |
| 第二部分 腰椎小关节滑膜囊肿与出血性滑膜囊肿诊断和治疗的回顾性对比研究 |
| 1. 对象及方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 第三部分 经骶骨椎体间钛笼植入原位融合与复位后经椎间孔椎体间自体髂骨融合治疗腰骶部2 度峡部裂性滑脱疗效的对比研究 |
| 1 对象及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（10）6-羟多巴胺诱导的去交感神经支配对大鼠骨代谢的影响（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 正文 |
| 实验一 应用μCT 观察6-羟多巴胺诱导的去交感神经支配对大鼠骨形态计量学的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 6-羟多巴胺诱导的去交感神经对大鼠生物力学指标评价 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 6-羟多巴胺诱导的去交感神经支配对大鼠 OPG/RANKL mRNA表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 6-羟多巴胺诱导的去交感神经支配对大鼠血清生化指标的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验五 6-羟多巴胺诱导的去交感神经支配对大鼠破骨细胞活力的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
四、腰椎相关结构的SP能神经支配（论文参考文献）
- [1]膈神经-迷走神经端侧吻合重建颈髓损伤大鼠膈肌功能的神经通路研究[D]. 马骁. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [2]VIP/SP介导胃的特定穴配伍干预GU模型大鼠作用机制研究[D]. 赵晋莹. 长春中医药大学, 2020(08)
- [3]阿仑膦酸钠对卵巢切除后大鼠腰椎关节突关节退变的保护作用及其机制的研究[D]. 张楠. 河北医科大学, 2020(01)
- [4]右美托咪定与布比卡因联合使用对犬股神经坐骨神经阻滞影响[D]. 王涛. 安徽农业大学, 2019(05)
- [5]Transwell共培养体系中背根神经节对骨髓间充质干细胞的作用及其机制研究[D]. 张帅帅. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [6]盘源性疼痛研究进展[J]. 何亮亮,倪家骧. 中国全科医学, 2017(26)
- [7]小关节源性腰痛的研究进展[J]. 徐庆平,徐聪,吴炳华,尹生江. 中国脊柱脊髓杂志, 2017(08)
- [8]颈椎小关节源性疼痛机制的神经生物学研究进展[J]. 唐峰,谢宁. 中国骨科临床与基础研究杂志, 2015(05)
- [9]小关节源性腰痛的基础及临床研究[D]. 龚凯. 第四军医大学, 2010(12)
- [10]6-羟多巴胺诱导的去交感神经支配对大鼠骨代谢的影响[D]. 敖建华. 第四军医大学, 2010(06)