一、Bcl-2/Bax基因表达对低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响（论文文献综述）
曹[1]（2021）在《基于ROS-MAPK-线粒体途径探讨补肾益精方治疗少弱精子症的作用机制》文中研究表明少弱精子症（Oligozoospermia and Asthenozoospermia,OAZS）主要表现为精子密度和精子活力的下降,约占男性不育的50%～75%,是引起男性不育的重要原因之一。各种因素如不良生活方式、精索静脉曲张、系统疾病、遗传变异、激素异常、环境污染等都会不同程度地影响男性的生殖功能,且它们之间常常共存,导致精液中活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生和精浆中抗氧化能力之间的动态平衡失调,引起氧化应激损伤,降低精子质量水平。OAZS生殖系统内过多的氧自由基、高活性氧的状态可以看作是中医学“血瘀”证候的一种表现形式,而“肾虚”则是“血瘀”的重要病因,正如《医林改错》中记载:“元气即虚,必不能达于血管,血管无气必停留而为瘀”。因此贾金铭教授认为“肾虚血瘀”是导致OAZS的基本病机,并以补肾活血,填髓益精立法创制了补肾益精方（YJD）,临床应用多年,疗效确切,可显着提高精子密度、精子活力及正常形态率等。本研究采用网络药理学与数据挖掘技术分析YJD的潜在药理机制,并以环磷酰胺复制的OAZS小鼠模型和体外培养的Leydig细胞及Sertoli细胞为载体,以ROS-OS-p38MAPK-线粒体途径为研究主线,探讨YJD抑制氧化应激损伤,提高精子质量的作用及机制。目的:传承创新名老中医学术经验,采用网络药理学方法探讨YJD治疗OAZS的作用机制,并通过体内外实验明确YJD抑制氧化应激损伤和细胞凋亡的作用,从ROS-OS-p38MAPK信号途径深入探讨其作用机制。方法:1 网络药理学分析:通过 TCMSP、Swiss Target Preduction、Pharm Mapper、UniProt、CTD、Genecards、String、David 等数据库;将 YJD12 种中草药采用MW≤500,AlogP≤10,Hdon≤5,HACC≤10,OB≥30%,DL≥0.18,CaCO-2≥-0.4七种仿制药原则筛选出这些成分中潜在的活性化合物及相对应的药物靶点,检索少弱精子症相关靶基因,两组交叉获取重合靶点,进行GO-BP及KEGG分析,从有效成分、潜在靶点、关键途径三个方面分析YJD治疗弱精子症的潜在药理机制。2动物实验:以环磷酰胺复制少弱精子症小鼠模型,通过睾丸--生精小管--睾丸间质细胞/支持细胞--线粒体--凋亡相关分子等多层次进行研究;采用ELISA、HE染色、细胞计数、流式分析、透射电镜、Western blot等手段,检测睾丸指数,生精小管形态及超微结构,血清TT、FT、LH、FSH,雄激素生成及利用相关蛋白 STAR、P450Scc、AR、ABP,睾丸/附睾组织ROS、MDA、SOD、GSH-Px,线粒体膜结构及功能,p38MAPK信号通路相关因子BAX、Bcl-2、Cyt-C、Caspase3等多纬度进行实验。3细胞实验:分别以TM3细胞（体外培养）和Sertoli细胞（原代提取）为研究对象,并制备YJD含药血清进行干预;采用siRNA干扰技术敲减目标基因p38MAPK,PCR检测敲减p38MAPK效率,CCK8检测细胞增殖情况,western blot检测敲减p38MAPK后相关指标的变化,从睾酮的合成分泌与利用两个方面进行实验。结果:1通过筛选,YJD12味中药共获得75个有效成分,对应190个潜在靶点;检索少弱精子症靶点共1125个（含少精子症713个,弱精子症412个）;两组交叉获得重合靶点30个;对30个重合基因进行拓扑分析,共获得9个核心指标:MAPK1、AR、ESR1、AKT1、MAPK8、EGFR、MMP9、PTGS2 和 MAPK14。30个重合靶点富集分析主要涉及细胞对脂质、有机化合物、有毒物质、活性氧、类固醇激素的反应;细胞对激素刺激、氧化应激、外界刺激、炎症反应的反应;及生殖系统/结构调节等生物学过程;及MAPK信号通路、胰岛素信号通路、TNF信号通路、雌激素信号通路、P53信号通路、神经营养蛋白信号通路、T细胞受体信号转导途径、cAMP信号通路及FoxO、VEGF等信号通路。2环磷酰胺建立少弱精子症模型小鼠的睾丸指数及体积减小（P<0.05,P<0.01）;精子密度和活力下降（P<0.01）;血清TT、FT水平下降（P<0.01）,血清FSH、LH水平增加（P<0.01）;睾丸及附睾组织中ROS、MDA含量明显增加（P<0.01）,SOD、GSH-Px含量减少（P<0.01）;生精小管结构紊乱;线粒体结构和功能下降;p38MAPK、Caspase3、BAX、Cyt-C蛋白表达水平增加（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2、STAR、P450scc、AR、ABP 蛋白表达水平降低（P<0.05,P<0.01）;给予YJD治疗后,OAZS模型小鼠睾丸指数无明显变化（P>0.05）,睾丸体积增加（P<0.01）;精子密度和活力增加（P<0.01）;血清TT、FT水平增加（P<0.01）,血清FSH、LH水平降低（P<0.01）;睾丸及附睾组织中ROS、MDA含量明显减少（P<0.01）,SOD、GSH-Px含量增加（P<0.01）;生精小管结构及线粒体结构和功能改善;p38MAPK、Caspase3、BAX、Cyt-C蛋白表达水平降低（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2、STAR、P450scc、ABP 蛋白表达水平增加（P<0.05,P<0.01）;AR蛋白水平无明显变化（P>0.05）。3 在敲减 TM3 细胞中 p38MAPK 后,p38MAPK、Caspase3、Cyt-C、STAR及P450scc蛋白水平表达量均明显下调（P<0.05）,BAX和Bcl-2蛋白相对表达量无明显变化（P>0.05）;以10%YJD含药血清干预细胞12h后,上述除Bcl-2上调外,其他指标蛋白表达水平再次出现明显下调（P<0.01）。在敲减Sertoli细胞中 p38MAPK 后,p38MAPK、Caspase3、Cyt-C、BAX 及 AR 蛋白水平表达量均明显下调（P<0.05）,ABP及Bcl-2蛋白相对表达量无明显变化;以10%YJD含药血清干预细胞12h后,p38MAPK、Caspase3、Cyt-C及BAX蛋白水平表达量再次明显下调（P<0.01）,Bcl-2蛋白相对表达量明显上调（P<0.05）,AR及ABP蛋白相对表达量无明显变化（P>0.05）。结论:补肾益精方（YJD）能够通过ROS/OS/p38MAPK-线粒体途径改善环磷酰胺制备少弱精子症（OAZS）小鼠模型,及Leydig细胞和Sertoli细胞模型的氧化应激（OS）损伤,改善线粒体结构及功能,从睾酮的分泌合成与利用等方面,促进精子发生和成熟,提高精子密度和活力,治疗少弱精子症。
梁景辉[2]（2021）在《桂药生精胶囊对不育症大鼠睾丸组织Bcl-2/Bax、Caspase-9/3表达的影响》文中研究说明目的:观察桂药生精胶囊对环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）诱导的不育症（Male Infertility,MI）大鼠睾丸组织Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3表达的影响。方法:采用SPF级雄性SD大鼠50只,随机抽取10只为空白组、40只为模型组,空白组予腹腔注射生理盐水,模型组予腹腔注射CTX（40mg/kg）,连续5天以建立MI大鼠模型。造模结束后随机抽取空白组大鼠3只、模型组大鼠5只进行模型验证,确定造模成功后将模型组大鼠均分为模型组、阳性对照组、桂药低剂量组、桂药中剂量组、桂药高剂量组,并开始进行干预。空白组与模型组给予生理盐水（1m L/d）灌胃,阳性对照组给予缬沙坦胶囊（1.44mg/m L/d）灌胃,桂药组给予桂药生精胶囊低、中、高剂量（28.5mg/ml/d、57mg/ml/d、114mg/ml/d）灌胃,连续4周。干预结束后测量大鼠体质量,在无菌条件下摘取大鼠睾丸、附睾称重,采用扩散法检测大鼠附睾精子参数、HE染色法观察大鼠睾丸组织结构的变化、IHC染色法检测各组大鼠睾丸组织Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达水平。结果:1.模型验证:模型组大鼠体质量、睾丸及附睾质量、精子密度、运动精子百分率、前向运动精子百分率均较空白组显着降低,模型组大鼠睾丸组织结构形态可见明显病理改变,此次大鼠模型制备符合MI模型标准。2.大鼠睾丸病理学观察:桂药低、中、高剂量组睾丸组织结构较模型组与阳性对照组有明显改善,生精小管形态趋向规则,基底膜增厚,纤维肌细胞与支持细胞数量分布均匀,精原细胞与精母细胞排列趋于整齐、层数增多,细胞外膜破损可见修复,精子细胞与精子数量增多,微血管供血改善,炎性细胞浸润减少。其中桂药高剂量组睾丸组织形态结构未见明显病理改变,改善最为明显,与空白组比较无明显差异。3.大鼠体质量:干预后桂药组、阳性对照组体质量与模型组比较显着增高（P<0.01）,且桂药中、高剂量组优于阳性对照组（P<0.05）,桂药高剂量组体质量与空白组比较无明显差异（P>0.05）。4.大鼠睾丸及附睾质量:（1）睾丸质量:桂药组、阳性对照组睾丸质量与模型组比较显着增高（P<0.01）,且桂药高剂量组优于阳性对照组（P<0.05）,桂药高剂量组睾丸质量与空白组比较无明显差异（P>0.05）。（2）附睾质量:桂药组、阳性对照组附睾质量与模型组比较上升（P<0.05）,且桂药高剂量组优于阳性对照组（P<0.05）,桂药高剂量组附睾质量与空白组比较无明显差异（P>0.05）。5.大鼠精子参数:（1）精子密度:桂药组、阳性对照组精子密度与模型组比较显着增高（P<0.01）,且桂药组优于阳性对照组（P<0.01）,桂药高剂量组精子密度与空白组比较无明显差异（P>0.05）。（2）运动精子百分率:桂药组、阳性对照组运动精子百分率与模型组比较显着增高（P<0.01）,且桂药中、高剂量组优于阳性对照组（P<0.01）,桂药高剂量组运动精子百分率与空白组比较无明显差异（P>0.05）。（3）前向运动精子百分率:桂药组、阳性对照组前向运动精子百分率与模型组比较显着增高（P<0.01）,且桂药中、高剂量组优于阳性对照组（P<0.01）,桂药中、高剂量组前向运动精子百分率与空白组比较无明显差异（P>0.05）。6.大鼠睾丸组织Bcl-2的表达情况:桂药组、阳性对照组Bcl-2阳性表达率与模型组比较显着增高（P<0.01）,且桂药组优于阳性对照组（P<0.05）,桂药高剂量组Bcl-2阳性表达率与空白组比较无明显差异（P>0.05）。7.大鼠睾丸组织Bax的表达情况:桂药组、阳性对照组Bax阳性表达率与模型组比较显着降低（P<0.01）,且桂药中、高剂量组优于阳性对照组（P<0.01）。8.大鼠睾丸组织Caspase-9的表达情况:桂药组、阳性对照组Caspase-9阳性表达率与模型组比较显着降低（P<0.01）,且桂药中、高剂量组优于阳性对照组（P<0.01）。9.大鼠睾丸组织Caspase-3的表达情况:桂药组、阳性对照组Caspase-3阳性表达率与模型组比较显着降低（P<0.01）,且桂药高剂量组优于阳性对照组（P<0.05）。结论:桂药生精胶囊能改善MI大鼠睾丸病理损伤,提高MI大鼠体质量、睾丸及附睾质量、精子总数及活动力,并能上调睾丸组织Bcl-2的表达,下调Bax、Caspase-9、Caspase-3的表达,且呈明显的量效关系,这可能是桂药生精胶囊治疗MI的作用机理之一。
常征辉[3]（2021）在《益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型的治疗作用与机制研究》文中认为少弱精子症是常见的男性不育疾病之一,其发病率在近些年逐年升高,亟需安全有效的治疗手段。西医治疗本病存在一定的局限性,疗效欠佳,中医药在男性不育的防治方面有独特优势。益肾兴阳胶囊作为一种中成药,早期主要用于治疗阳痿早泄,现在越来越广泛地用于治疗少弱精子症,因此研究并揭示益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的作用机制具有重要意义。然而,目前尚未对其整体的药效机理形成全面的认识,为此迫切需要有效的研究思路和方法来对其药效物质基础及作用机制进行研究,指导临床安全、合理地用药。论文包括文献综述、网络药理学预测和实验研究。文献综述系统总结了近年来中医药对少弱精子症的研究进展,探讨了传统中医药对少弱精子症的认识、中医辨证分型、中药复方研究等进展;从现代医学角度探讨了少弱精子症的病因、睾丸生精功能的调控机制、治疗方法等。以上内容的探讨,为本课题顺利开展做了铺垫。研究目的:本研究拟通过网络药理学预测益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的关键靶点、生物通路等相关机制,为动物实验药效机制研究奠定基础。设计动物实验,观察益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型精子质量、生精细胞凋亡、增殖分化、以及精子能量代谢的影响,阐述其作用机制,为益肾兴阳胶囊组方用药及作用机制提供实验探索。研究方法:1.网络药理学通过多个中药成分与靶标数据库收集和筛选益肾兴阳胶囊的化学成分,构建益肾兴阳胶囊作用靶点PPI网络（protein protein interaction network,PPI network）;同时从疾病基因数据库对少弱精子症靶点进行检索及筛选;并将疾病基因映射到PPI网络,获取益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的关键作用靶点;构建益肾兴阳胶囊来源中药-成分-靶点-模块-通路网络,通过富集分析预测益肾兴阳胶囊的潜在作用机制。2.实验研究。复制环磷酰胺诱导的少弱精子症小鼠模型,采用精液分析、电镜、流式细胞、Western Blot等方法,对正常组、模型组、益肾兴阳胶囊高、中、低剂量组、枸橼酸氯米芬对照组、万艾可对照组、汇仁肾宝对照组进行精子质量、精子腺嘌吟核苷三磷酸（Adenosine triphosphate,ATP）含量、生精细胞周期、睾丸超微结构、睾丸组织 B 细胞淋巴瘤-2 基因（B-cell lymphoma 2,Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2 Associated X Protein,Bax）、磷脂酶肌醇 3-激酶（Phosphatidylinositol-3-kinase,PI3k）、蛋白激酶B（Protein kinase B,Akt）、干细胞因子（Stem Cell Factor,SCF）、C-Kit 原癌基因（C-Kit proto-oncogeneprotein,C-Kit）、A 细胞凋亡信号调节激酶 1（Apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1）、c-JunN 端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）表达的检测。复制雷公藤多苷诱导的少弱精子症大鼠模型,采用精液分析、ELISA、流式细胞、RT-PCR等方法,对正常组、模型组、益肾兴阳胶囊高、中、低剂量组、枸橼酸氯米芬对照组、万艾可对照组、汇仁肾宝对照组进行精子质量、性激素水平、线粒体膜电位、睾丸组织TGF-β1/Smads信号转导通路蛋白、电压依赖性阴离子通道2（Voltage-dependent anion channel 2,VDAC2）、电压依赖性阴离子通道 3（Voltage-dependent anion channel 3,VDAC3）、细胞周期检查点激酶 1（Cell cycle checkpoint kinase 1,CHK1）、细胞周期检查点激酶 2（Cell cycle checkpoint kinase 2,CHK2）蛋白表达的检测。研究结果:1.网络药理学共得到益肾兴阳胶囊418个化学成分、2447个靶点和少弱精子症134个致病基因;其中17个靶点为益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的关键作用靶点,它们参与了 8个关键模块;中药-成分-靶点-模块-通路网络分析发现,其中有57个成分参与调控了关键的作用靶点和关键模块,有可能影响生精细胞凋亡、增殖分化和精子能量代谢。2.动物实验首先模型建立成功,与正常对照组相比,模型动物少弱精子症成立。小鼠实验药效学研究显示,益肾兴阳胶囊可以改善少弱精子症小鼠模型精子质量和精子ATP含量（P<0.01）;睾丸组织超微结构与模型组相比,益肾兴阳胶囊各组生精细胞、支持细胞线粒体明显增多,轻微肿胀,并且可见正常形态高尔基体,睾丸超微结构改善明显。作用机制研究显示,益肾兴阳胶囊可以调控少弱精子症小鼠模型生精细胞周期、睾丸组织Bcl-2、Bax、PI3k、Akt、SCF、C-Kit、ASK1、JNK 蛋白表达（P<0.05）。大鼠实验药效学研究显示,益肾兴阳胶囊可以改善少弱精子症大鼠模型精子质量、性激素水平和精子线粒体膜电位（P<0.05）。作用机制研究显示,益肾兴阳胶囊可以调控少弱精子症大鼠模型睾丸组织TGF-β1/Smads信号转导通路、VDAC2、VDAC3、CHK1、CHK2蛋白表达（P<0.05）。通过动物实验,验证了网络药理学相关的生物学通路预测。研究结论:1.益肾兴阳胶囊可以显着提高少弱精子症模型精子质量并改善睾丸组织超微结构损伤情况。2.益肾兴阳胶囊可以抑制少弱精子症模型生精细胞凋亡,具体机制可能与调控 Bcl-2、Bax、PI3k、Akt、SCF、C-Kit、ASK1、JNK 蛋白表达有关。3.益肾兴阳胶囊可以改善睾丸的生精功能,促进生精细胞增殖分化,具体机制可能与调控TGF-β1/Smads信号转导通路以及CHK1、CHK2蛋白表达有关。4.益肾兴阳胶囊可以增强少弱精子症模型精子能量代谢,具体机制可能与提高线粒体膜电位、增强VDAC2、VDAC3蛋白表达有关。综上所述,本研究证实了益肾兴阳胶囊具有补肾精、促生殖的治疗效果,也揭示了益肾兴阳胶囊通过抑制生精细胞凋亡、促进生精细胞增殖分化、增强精子能量代谢治疗少弱精子症的相关作用机制。
王继升[4]（2021）在《补肾生精法治疗少弱精子症的数据挖掘及其调控生精细胞的机制研究》文中研究表明少弱精子症已成为男科疾病研究热点。西医治疗存在一定的局限性,临床治疗无特效药物推荐,多以经验性治疗为主;补肾生精法作为治疗少弱精子症的常用中医治法,具有独特的疗效优势,能有效地弥补西医治疗少弱精子症的不足。广嗣育麟汤作为东直门医院男科治疗少弱精子症协定处方,取得了良好的临床疗效,本方以菟丝子-枸杞子为君药,是补肾生精法的临床经验方。目的1探讨补肾生精法源流及发展脉络2挖掘李海松教授及国家专利数据库中其他中医学者治疗少弱精子症用药经验及治法治则3探索广嗣育麟汤治疗少弱精子症的临床疗效4探讨菟丝子-枸杞子治疗少弱精子症的实验机制方法文献研究:基于中医文献及数据库,整理历代着作中关于补肾生精法及肾藏精理论在男性不育症治疗的文献,梳理补肾生精法的发展脉络及源流。数据挖掘:基于中医传承辅助平台,分别以李海松教授治疗少弱精子症438首处方以及国家专利库中74首治疗少弱精子症中医处方为挖掘对象,探索李海松教授及其他中医学者用药规律及治法治则。临床研究:基于数据挖掘结果中李海松教授治疗少弱精子症的处方——“广嗣育麟汤”,对其进行临床疗效评价,采用病例自身前后对照研究方法,纳入120例少弱精子症患者治疗12周,评价指标为精液质量及中医证候评分。实验研究:基于数据挖掘结果中补肾生精法代表药对——菟丝子、枸杞子（SC-FL）,进行实验机制验证,通过细胞实验和动物实验相结合,探索补肾生精代表药对的具体机制。细胞实验以精原细胞（GC-1spg）为研究对象,分为4组,正常组（NC组）、模型组（GTW组）、左卡尼汀治疗组（GTW+LEV组）、菟丝子-枸杞子治疗组（GTW+SC-FL组）。运用雷公藤多苷含药血清体外干预制备生精功能障碍细胞模型,治疗组分别以左卡尼汀（LEV）及SC-FL干预治疗;动物实验也同样分为4组,每组6只,运用GTW灌胃4周制备少弱精子症大鼠模型,治疗组分别以LEV和SC-FL灌胃治疗4周。观察各组大鼠的一般状况及血清激素水平;运用流式细胞技术,观察各组GC-1spg的细胞周期、线粒体膜电位、增殖凋亡;运用透射电镜观察GC-1spg细胞及大鼠睾丸组织中细胞器及超微结构;运用免疫荧光染色技术、WB及RT-qPCR技术检测GC-1spg细胞及大鼠睾丸组织中PI3K/AKT通路相关蛋白及mRNA的分布及含量。结果1文献研究:补肾生精法是从中医肾藏精理论发展而来。早在先秦时期的着作中就奠定补肾生精法基础,在魏晋隋时期的文献对补肾生精法有一定的继承与创新,经历了唐宋元时期补肾生精理论趋于完善、系统化,在明清时期的文献古籍记载中补肾生精理论得到了蓬勃发展,并最终形成完备体系流传至今。2通过对导师的处方及经验挖掘发现,导师认为少弱精子症病因常以肾精亏虚为主,涉及肝、肾、脾三脏,治疗以微调阴阳为纲,以补肾生精为目,整体论治。用药出现频率最高的是菟丝子、枸杞子两味药,其次是覆盆子、五味子、熟地黄、黄芪、车前子、牡蛎、当归,上述9味药同山药共同组成“广嗣育麟汤”,菟丝子、枸杞子为广嗣育麟汤君药。通过对国家专利数据库的处方的挖掘结果发现,出现频率最高的同样为菟丝子、枸杞子,说明此药对在临床中确有一定疗效,其机制有待于实验验证。3通过临床研究发现经过广嗣育麟汤治疗后患者的精液浓度及活动率明显升高,中医主要证候和次要证候也有显着改善（P<0.05或P<0.01）,广嗣育麟汤治疗少弱精子症临床有效率为92.7%。试验过程中患者未出现不良反应。4细胞实验研究结果表明,在细胞周期、线粒体膜电位及凋亡方面:与NC组相比,GTW组GC-1spg细胞的G0/G1和G2/M期的百分率显着降低、S期百分率明显升高（P<0.01）。与 GTW 组相比,GTW+LEV 组和 GTW+SC-FL 组 GC-1spg 细胞的 G0/G1 和 G2/M期的生精细胞百分率升高、S期百分率降低（P<0.05,P<0.01）。与GTW+LEV组相比,GTW+SC-FL组GC-1 spg细胞的G0/G1和G2/M期的百分率明显升高、S期百分率降低（P<0.01）。在细胞超微结构方面:与NC组相比,GTW组的GC-1spg细胞膜大面积破裂,细胞器游离,膜周围少量伪足与突起,细胞基质大面积密度减低,空泡变,整体呈崩解状态。细胞核形状变形严重,局部凹陷,多核仁,核膜清晰;线粒体数量丰富,大多重度肿胀变形,嵴断裂、消失,部分严重者,膜崩解、基质消失;粗面内质网明显扩张;自噬溶酶体数量较多,高尔基体肥大,高尔基体池明显扩张;脂滴少量存在。与GTW组相比,GTW+LEV和GTW+SC-FL组GC-1spg各细胞器的超微结构发生明显恢复,各个细胞器形态均有所恢复,但与NC组大鼠相比,其结构尚未完全恢复。在蛋白及mRNA表达方面:与NC组相比,GTW组GC-1spg细胞PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白及mRNA表达显着降低（P<0.01或P<0.05）;与GTW组相比,GTW+LEV组和GTW+SC-FL组GC-1spg细胞PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白及mRNA表达显着上升（P<0.01 或P<0.05）;与 GTW+LEV 组相比,GTW+SC-FL 组 GC-1spg 细胞 PI3K、Bcl-2蛋白及mRNA表达显着上升（P<0.01或P<0.05）,GTW+SC-FL组GC-1 spg细胞p-AKT蛋白及mRNA表达无显着差异（P>0.05）。与NC组相比,GTW组GC-1spg细胞中BAD、BAX蛋白及mRNA表达呈现显着增高的趋势（P<0.01或P＜0.05）;与GTW组相比,GTW+LEV组和GTW+SC-FL组GC-1spg细胞BAD、BAX蛋白及mRNA表达显着下降（P<0.01或P<0.05）;与GTW+LEV组相比,GTW+SC-FL组GC-1spg细胞BAD、BAX蛋白及mRNA表达显着下降（P<0.01或P<0.05）。动物实验研究结果表明,治疗后大鼠一般状况较模型组显着改善。精液常规方面:同NC组比较,GTW组大鼠的精子浓度、PR+NP显着降低（P<0.01）;同GTW组比较,GTW+SC-FL 和 GTW+LEV 组精子浓度、PR+NP 显着增加（P＜0.01）;与 GTW+LEV组比较,GTW+SC-FL组精子浓度显着升高（P<0.01）,GTW+SC-FL组的PR+NP无明显差异（P>0.05）。血清性激素水平方面:与GTW组进行对比发现,GTW+LEV和GTW+SC-FL组血清FSH、LH、T显着升高（P<0.01或P<0.05）;与GTW+LEV组进行对比发现,GTW+SC-FL 组的血清 FSH、LH、T 显着升高（P＜0.01）;在组织结构及超微结构方面:NC组精母细胞形态及结构规则。细胞核（N）丰满且结构形态正常呈圆形,内部含有丰富的常染色质;核仁形态结构明显（NU）;胞浆内内质网（ER）易见,也可见多少不等的溶酶体（AAS）和自噬小体（AP）。GTW组精母细胞形态及结构不规则。细胞膜破损,N结构及形态发生改变呈圆形或椭圆形,常染色质较丰富、少量异染色质凝集;胞浆内ER扩张,也可见多少不等的AAS和AP。经过SC-FL治疗后,被GTW损伤的细胞器有所恢复。在蛋白及mRNA表达方面:与GTW组相比,GTW+LEV组和GTW+SC-FL组PI3K、AKT、Bcl-2蛋白及mRNA表达显着上升（P<0.01或P<0.05）;与GTW+LEV组相比,GTW+SC-FL组PI3K、AKT、Bcl-2蛋白及mRNA表达显着上升（P<0.01或P<0.05）。结论1数据挖掘结果表明,菟丝子、枸杞子为补肾生精法治疗少弱精子症的代表药对;李海松教授治疗少弱精子症以微调阴阳为纲,以补肾生精为目,广嗣育麟汤为李海松教授治疗少弱精子症的经验方。2临床研究结果表明,广嗣育麟汤可以有效改善少弱精子症患者的精液质量,降低肾精亏虚证患者中医症状评分。3实验研究结果表明,SC-FL可以有效改善生精障碍模型大鼠一般状态,提高精液质量,参与下丘脑-垂体-性腺轴性激素的调控,修复GC-1spg和睾丸组织的超微结构;SC-FL可以通过PI3K/AKT信号通路促进生精细胞的增殖和抑制生精细胞的凋亡。综上所述,补肾生精法可以有效治疗肾精亏虚型少弱精子症,其调控PI3K/AKT信号通路蛋白和mRNA是作用机制之一。
魏闪闪[5]（2020）在《冬虫夏草提取液对60Coγ电离辐照小鼠器官的保护及其机制》文中指出目的:研究冬虫夏草提取液（CSE）对60Coγ电离辐照小鼠脾脏与睾丸组织损伤的保护作用,并初步探讨其分子机制,为一种潜在的新型辐照治疗药物提供有力的理论支持。第一部分CSE对电离辐照小鼠脾脏组织损伤的保护作用方法:C57BL/6小鼠随机分为5组:未辐照组（Control组）、辐照组（Model组）、CSE312.5mg/kg低剂量组（CSE-L组）、625mg/kg中剂量组（CSE-M组）、1250mg/kg高剂量组（CSE-H组）。除Control组外,其余组均以单次8Gy 60Coγ射线全身辐照小鼠建立辐照损伤模型,治疗组连续给药28天。（1）分别检测5组小鼠体重、脾脏指数、生存率;（2）检测Control、Model、CSE-M组小鼠外周血白细胞（WBC）、中性粒细胞、红细胞（RBC）、淋巴细胞、血小板、单核细胞的数目;（3）HE、MPO、TUNEL染色分别检测Control、Model、CSE-M组小鼠脾脏组织形态结构、炎性浸润细胞、凋亡细胞数目;（4）Western blot检测Control、Model、CSE-M组小鼠脾脏组织Bax、Bcl-2、Caspase 3、Cleaved-Caspase 3蛋白表达;（5）流式检测Control、Model、CSE-M组小鼠血清中免疫球蛋白、炎症因子的含量。结果:（1）与Control组相比,Model组小鼠体重、脾脏指数均显着降低,表明造模成功;与Model组相比,CSE-L、CSE-M、CSE-H组小鼠的上述指标均呈剂量依赖性显着升高;（2）Control、CSE-M、CSE-H组的小鼠生存率为100%,Model组的小鼠生存率为80%,CSE-L组小鼠生存率为90%;（3）与Control组相比,Model组小鼠外周血中WBC、淋巴细胞、单核细胞、血小板显着降低;与Model组相比,CSE-M组小鼠外周血中WBC、淋巴细胞、血小板显着升高;（4）HE、MPO、TUNEL结果分别表明:与Control组相比,Model组小鼠脾脏组织结构疏松、炎性浸润与凋亡细胞数目显着增多;与Model组相比,CSE-M组小鼠脾脏组织结构紧密、炎性浸润与TUNEL阳性细胞数目明显减少;（5）Western blot结果表明:与Control组相比,Model组小鼠脾脏组织Bcl-2表达水平显着降低、Bax与Cleaved-Caspase 3表达水平明显升高;与Model组相比,CSE-M组小鼠脾脏组织中上述蛋白表达量均得到显着逆转;（6）流式结果表明:与Control组相比,Model组小鼠血清中Ig A、Ig G1、Ig G2a、Ig G2b、Ig G3、Ig M含量均明显降低,IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α含量显着升高;与Model组相比,CSE-M组小鼠血清中Ig A、Ig G2a、Ig G2b、Ig M均显着升高,IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显降低。第二部分CSE对电离辐照诱导的小鼠脾脏单核细胞损伤的保护作用方法:首先,通过分离第一部分实验中的各组小鼠脾脏单核细胞,分别检测以下两个指标:（1）CCK-8检测第一部分分离的5组小鼠脾脏单核细胞活力;（2）流式检测第一部分Control、Model、CSE-M组小鼠脾脏单核细胞中CD3+、CD4+、CD8+、CD19+细胞比例。其次是分离正常的C57BL/6小鼠的脾脏单核细胞,并分为Control组（正常细胞）、Model组(4 Gy 60Coγ电离辐照细胞)、CSE-L治疗组（31.25mg/m L）、CSE-M治疗组（62.5mg/m L）、CSE-H组（125mg/m L）共5组,分别检测以下三个指标:（1）CCK-8检测正常C57/BL6小鼠分离的脾脏单核细胞中Control、CSE-L、CSE-M、CSE-H组细胞活力;（2）CCK-8检测正常C57BL/6小鼠分离的5组脾脏单核细胞的活力;（3）流式检测正常C57BL/6小鼠分离的脾脏单核细胞中Control、Model、CSE-M组的CD3+、CD4+、CD8+、CD19+细胞比例。结果:首先,通过分离第一部分实验中电离辐照C57BL/6小鼠脾脏单核细胞相关的实验,可以得到以下两条结果:（1）与Control组相比,Model组中电离辐照小鼠分离的脾脏单核细胞活力显着降低;与Model组相比,CSE-L、CSE-M、CSE-H组细胞活力呈剂量依赖性明显增强;（2）与Control组相比,Model组中电离辐照小鼠分离的脾脏单核细胞中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD19+比例显着降低;与Model组相比,CSE-M组小鼠脾脏中的上述阳性细胞比例明显升高。其次,通过分离正常C57BL/6小鼠脾脏单核细胞相关的实验,可以得到以下三条结果:（1）与Control组相比,CSE（62.5mg/m L、125mg/m L）能显着提高正常的脾脏单核细胞活力;（2）与Control组相比,Model组电离辐照脾脏单核细胞活力显着降低;与Model组相比,CSE（62.5mg/m L、125mg/m L）能显着提高辐照后脾脏单核细胞的活力;（3）与Control组相比,Model组中电离辐照脾脏单核细胞的CD3+、CD19+细胞比例显着降低;与Model组相比,CSE（125mg/m L）能明显提高辐照脾脏单核细胞后CD3+、CD19+细胞数目。第三部分CSE对电离辐照诱导小鼠睾丸组织损伤的保护作用方法:（1）分别检测第一部分中5组小鼠睾丸组织中丙二醛（MDA）与超氧化物歧化酶（SOD）活力;（2）HE、MPO、TUNEL染色分别检测Control、Model、CSE-H组小鼠睾丸组织的形态结构、炎性浸润细胞及凋亡细胞数目;（3）分别检测Control、Model、CSE-H组小鼠睾丸组织中凋亡相关基因及蛋白表达。结果:（1）HE、MPO、TUNEL结果分别表明:与Control组相比,Model组小鼠睾丸组织结构结构疏松、形态改变、腔内空虚、炎性浸润及凋亡细胞数目增多;与Model组相比,CSE-M组小鼠睾丸组织结构紧密、炎性浸润细胞与TUNEL阳性细胞数目均明显减少;（2）与Control组对比,Model组小鼠睾丸组织中SOD活力、抗凋亡基因（GSH-PX、CAT、GPX、Bcl-2）m RNA与抗凋亡蛋白（Bcl-2）表达量水平均显着降低,MDA含量、促凋亡基因（Bax、Caspase 3）m RNA与促凋亡蛋白（Bax、Cleaved-Caspase 3）表达量水平均显着上升。与Model组相对比,CSE-H组小鼠睾丸组织中SOD活力、该部分实验中的抑凋亡相关基因及蛋白表达量均明显上升,MDA含量、该部分实验中的促凋亡相关基因及蛋白表达量水平均明显降低。结论:1.CSE有效地升高60Coγ射线电离辐照诱导小鼠生存率、体重、脾脏指数及外周血中WBC、淋巴细胞、血小板的水平;2.CSE有效地调节60Coγ射线电离辐照诱导小鼠脾脏单核细胞活力及CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD19+阳性细胞比例、血清中免疫球蛋白及炎症因子水平,进而提高小鼠体内适应性免疫功能;3.CSE有效地调节60Coγ射线电离辐照诱导的小鼠睾丸组织中MDA含量及SOD活力,从而提高抗氧化能力;4.CSE有效保护60Coγ射线电离辐照诱导的小鼠脾脏、睾丸组织中形态结构损伤,并明显降低了炎性浸润细胞及TUNEL阳性细胞的数目;5.CSE有效地降低60Coγ射线电离辐照诱导的小鼠脾脏、睾丸组织中细胞凋亡的产生,并调节Bcl-2、Bax蛋白的表达,进而抑制下游Caspase 3通路的激活。
管斯琪[6]（2020）在《补肾生精法治疗少弱精子症及其调控生精细胞增殖与凋亡的研究》文中研究指明目的人类生育力逐年降低已经成为影响发展的医学和社会学问题,男性因素导致的不孕不育占了 40%-50%,其中少弱精子症是男性不育症最常见的病因之一。对于特发性精液异常,西药治疗效果欠佳,手术治疗的应用范围存在一定局限性,而中医药具有较好的疗效。菟枸助育汤是在五子衍宗丸的基础上加减化裁而来,临床用于治疗少弱精子症逾20年,但目前尚无相关的研究。故本研究设计临床试验,观察评价菟枸助育汤对男性不育少弱精子症患者的临床疗效,并设计动物实验探究菟枸助育汤的核心药对“菟丝子-枸杞子”对生精功能障碍模型大鼠生精功能的影响,并对其具体的作用机制进行探讨。方法临床研究:收集男性不育少弱精子症76例,采用无病例对照研究的方法,观察菟枸助育汤对少精子症和弱精子症受试者精液质量（包括精液液化状态、精液量、精子活动率、精子浓度和总数等指标）和中医证候评分的干预作用。入组时,采集所有受试者的一般信息、病史、合并用药、体格检查等相关资料。研究第1天起每日给予入组的受试者菟枸助育汤中药免煎颗粒治疗,疗程共90天,分别于第0、30、60、90天各进行一次访视,记录受试者的精液常规结果和中医证候评分,同时进行安全性观察,记录各类不良事件,填写病例报告表,每次访视时严格进行脱落、剔除的评估,最后统计所有数据。实验研究:1.将78只SD大鼠随机分为空白对照组（NC组）、模型对照组（GTW组）、左卡尼汀组（GTW+LEV组）、菟丝子-枸杞子药对组（GTW+SCFL组）和药对+抑制剂组（LY+SCFL组）。2.除NC组以外,其余各组用雷公藤多苷（40mg/kg）灌胃4周,建立生精功能障碍模型。3.第5周起GTW+LEV组（予10ml/kg左卡尼汀灌胃）、GTW+SCFL组（予菟丝子-枸杞子中药液灌胃）和LY+SCFL组（予菟丝子-枸杞子中药液灌胃）每日分别予以相应药物干预,LY+SCFL组于第1周起每周1次尾静脉注射PI3K抑制剂。4.实验8周后测定各组大鼠精子质量、附睾/睾丸脏器系数,检测性激素、抑制素B、附睾肉毒碱的水平,光镜下和透射电镜下观察睾丸的组织病理形态和细胞的超微结构,用免疫组化法、western blot以及Real-Time PCR技术检测大鼠睾丸组织SCF、c-kit、PI3K、p-Akt、Bad、Bcl-2 和 Bax 蛋白及 mRNA 的表达。结果临床研究:本研究共完成临床病例76例,纳入研究的男性不育少精子症和弱精子症患者经过菟枸助育汤治疗后,总体的精液质量中液化状态、PR精子百分比、PR+NP精子百分比、精子浓度和精子总数等疗效性指标显着改善,具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;中医证候评分随着治疗进行有了明显的下降（P<0.05或P<0.01）;疗效判定为“痊愈”的11例,“显效”29例,“有效”32例,“无效”4例,总有效率为94.74%。整个观察期间脱落病例4例,无剔除病例,未见任何不良反应报告。实验研究:经菟丝子-枸杞子干预后的GTW+SCFL组与GTW组相比,大鼠的一般状态、附睾脏器系数、精子质量、卵泡生成素（FSH）、黄体生成素（LH）、泌乳素（PRL）和附睾肉毒碱均有显着的改善,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;睾丸组织病理形态及细胞的超微结构观察发现,GTW+SCFL组与GTW组比较,生精小管结构、排列较正常,生精细胞明显增多,形态改善,内含的线粒体等细胞器增多;免疫组化、western blot和Real-Time PCR结果显示,与GTW组比较,GTW+SCFL组大鼠睾丸SCF、c-kit、PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白含量升高,Bax、Bad蛋白表达下降（P<0.05或P<0.01）;LY+SCFL组与GTW+SCFL组相比,SCF、c-kit和PI3K的表达无明显差异,p-Akt和Bcl-2表达减少,Bad和Bax的蛋白表达增加（p<0.05或P<0.01）。结论1.菟枸助育汤在改善男性不育少弱精子症患者的精液参数和肾虚证候中医评分方面疗效显着,能提高患者的生精功能。2.菟枸助育汤中的核心药对“菟丝子-枸杞子”可以改善生精功能障碍模型大鼠一般状态、附睾脏器系数、精子质量、FSH、LH、PRL和附睾肉毒碱,并对雷公藤多苷致睾丸组织和生精细胞的形态结构和功能的损伤具有较好的修复作用。3.“菟丝子-枸杞子”药对可以有效调控模型大鼠睾丸组织SCF、c-kit、PI3K、p-Akt、BAD、Bcl-2、Bax 蛋白及其 mRNA 的表达,通过调控 SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2 信号通路促进生精细胞增殖和抑制生精细胞凋亡的作用。综上,菟枸助育汤可有效提高男性不育少弱精子症患者的生精功能,临床疗效显着,其作用机制可能是通过SCF/c-kit--PI3K--Bcl-2通路调控生精细胞增殖和凋亡来实现的。
安雨[7]（2020）在《艾烟干预弱精子症大鼠的细胞凋亡机制研究》文中研究说明弱精子症是一种以精子进行性运动力低下为主要表现的疾病,属于男性不育的范畴,因其难治、复发率高的特点而成为现今生殖医学领域的一大难题。艾灸是治疗男性不育的常用方法,其作用机制备受关注。前期研究发现艾烟是艾灸起效的三途径之一,并且对普通Wistar大鼠的生殖功能有促进作用。本研究拟从细胞凋亡的角度,通过动物实验研究艾烟对弱精子症的作用机制。目的:使用奥硝唑灌胃法建立弱精子症大鼠模型,并给予不同浓度艾烟干预,观察艾烟对大鼠精子参数和细胞凋亡的影响,明确艾烟对弱精子症模型大鼠的作用效果,进一步揭示艾烟改善弱精子症的作用机制。方法:72只SD大鼠,按随机数字表法分为6组:溶剂对照组、模型组、香烟组、低浓度艾烟组、中浓度艾烟组、高浓度艾烟组,每组12只。溶剂对照组只给予0.2%竣甲基纤维素钠溶液（因奥硝唑难溶于水,需用该溶液配制造模药物）灌胃,其余5组用奥硝唑溶液灌胃,灌胃剂量是:前10天400mg/（kg·d）,第11天起200 mg/（kg·d）,共灌胃8周。低、中、高艾烟组从第11天开始进行艾烟干预,每日1次,每次20min,一周干预6天至第8周末,艾烟浓度分别为1 ×、3 ×、9 ×临床艾烟浓度。香烟组的干预时长、频率、浓度,与中浓度艾烟组相同。实验结束后:1.称取大鼠体重及睾丸重量,观察睾丸指数变化;使用扩散法收集大鼠附睾尾中的精子,使用计算机辅助精子分析系统检测大鼠的各项精子参数:精子密度、精子活力、精子活率、A级精子数、（A+B）级精子数。2.通过HE染色观察大鼠睾丸组织病理结构变化;通过TUNEL染色观察大鼠睾丸组织细胞的凋亡情况,使用体视学图像分析系统统计大鼠睾丸组织细胞的凋亡指数。3.使用Western Blot法检测睾丸组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平。所有数据结果用SPSS20.0软件统计分析。结果:1.大鼠睾丸指数、精子参数与溶剂对照组相比:模型组、香烟组大鼠的精子活力、精子活率、A级精子数、（A+B）级精子数均显着下降（P<0.01）;低浓度艾烟组大鼠的精子活力、精子活率、A级精子数、（A+B）级精子数还存在明显差异（P<0.01）;中、高浓度艾烟组大鼠的精子活力、精子活率、A级精子数、（A+B）级精子数的差异不明显（P>0.05）。与模型组相比:低浓度艾烟组大鼠的精子活力、精子活率、（A+B）级精子数显着提高（P<0.01）,A级精子数显着提高（P<0.05）;中、高浓度艾烟组大鼠的精子活力、精子活率、A级精子数、（A+B）级精子数显着提高（P<0.01）。与香烟组相比:低浓度艾烟组大鼠的精子活力、精子活率、A级精子数、（A+B）级精子数的差异不明显（P>0.05）;中浓度艾烟组大鼠的精子活力、（A+B）级精子数显着提高（P<0.01）,精子活率显着提高（P<0.05）;高浓度艾烟组大鼠的精子活力、A级精子数、（A+B）级精子数显着提高（P<0.01）,精子活率显着提高（P<0.05）。6组大鼠的睾丸指数、精子密度无统计学差异（P>0.05）。2.大鼠睾丸组织HE染色、凋亡指数溶剂对照组大鼠睾丸生精小管、各级生精细胞正常;模型组大鼠睾丸生精小管萎缩、各级生精细胞缺失及排列紊乱;香烟组大鼠睾丸损伤重于模型组;给予各浓度艾烟干预后,生精小管的结构、各级生精细胞的数量及排列均有不同程度恢复;中浓度艾烟组大鼠睾丸组织恢复更明显;高浓度艾烟组大鼠睾丸组织与溶剂对照组相比还存在一定差距。与溶剂对照组相比:模型组的凋亡指数显着上升（P<0.01）;香烟组的凋亡指数显着上升（P<0.05）;低、中浓度艾烟组凋亡指数的差异不明显（P>0.05）;高浓度艾烟组的凋亡指数显着上升（P<0.05）。与模型组相比:香烟组凋亡指数的差异不明显（P>0.05）;低浓度艾烟组的凋亡指数显着下降（P<0.01）;中浓度艾烟组的凋亡指数显着下降（P<0.05）;高浓度艾烟组凋亡指数的差异不明显（P>0.05）。与香烟组相比:低、中浓度艾烟组的凋亡指数显着下降（P<0.05）;高浓度艾烟组凋亡指数的差异不明显（P>0.05）。3.凋亡相关蛋白表达情况与溶剂对照组相比.:模型组的Bcl-2表达显着下降（P<0.05）,Bax表达显着上升（P<0.01）;低、中浓度艾烟组的Bcl-2、Bax、Caspase-3表达无差异（P>0.05）;高浓度艾烟组的Bcl-2、Bax表达无差异（P>0.05）、但Caspase-3表达显着上升（P<0.05）。与模型组相比:香烟组的Bcl-2、Bax、Caspase-3表达无差异（P>0.05）;低浓度艾烟组的Bax表达显着下降（P<0.01）,Caspase-3表达显着下降（P<0.05）;中浓度艾烟组的Bcl-2表达显着上升（P<0.01）,Bax表达显着下降（P<0.05）;高浓度艾烟组的Bax表达显着下降（P<0.05）。与香烟组相比:低浓度艾烟组的Bax、Caspase-3表达显着下降（P<0.05）;中浓度艾烟组的Bcl-2表达显着上升、Bax表达显着下降（P<0.05）;高浓度艾烟组的Bcl-2、Bax、Caspase-3表达无差异（P>0.05）。结论:艾烟可以提高弱精子症大鼠精子活力、精子活率、A级精子数、（A+B）级精子数,改善睾丸生精小管结构、改善睾丸内环境,且中浓度艾烟的干预效果最佳,其机制可能是通过上调抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达、下调促凋亡基因Bax、Caspase-3蛋白表达,减少睾丸组织细胞的凋亡数量,以抑制由细胞凋亡的线粒体途径异常引起的睾丸组织细胞凋亡,从而改善弱精子症大鼠的精子质量。
索婷婷[8]（2020）在《中强磁场辐照对雄性小鼠生殖系统的影响及机制探讨》文中研究指明研究背景随着现代科技的发展,各种电力电气设备和生活类电子产品比比皆是,使得不同频率、不同强度的电磁辐射无处不在,人类暴露于磁场环境的机会随之增加。在生物医学领域,中强磁场是指磁感应强度大于1 m T且小于等于1 T的磁场[1],广泛应用在工农业生产、交通运输、医疗卫生和国防军事等领域,其生物学效应也成为近几年学术界研究的热点之一。生殖系统是人类繁衍生息的基础,对雄性动物而言,睾丸是精子发生和成熟的重要生殖器官[2]。同时,睾丸对各种刺激因素如温度、化学物质、药物、辐射等都比较敏感,在一定条件下均可影响精子的发生过程、睾丸的形态结构及功能。目前研究多集中在极低频交变磁场和稳态强磁场的生物学效应方面,中强磁场对生殖系统的影响及机制研究较少。本文以雄性BALB/c小鼠为研究对象,从精子质量、睾丸形态结构、生精细胞凋亡、血清性激素水平和睾丸抗氧化能力等方面研究了中强磁场辐照对雄性小鼠生殖系统的影响,并对其相关作用机制进行初步探讨。研究目的探讨中强磁场辐照对雄性小鼠生殖系统的影响及作用机制,为脉冲磁场卫生防护标准研究提供参考依据。第一部分中强磁场辐照对雄性小鼠生殖系统的影响材料与方法1.辐照装置:中强磁场发生器采用大容量脉冲电容器放电产生脉冲大电流,继而产生中强磁场,波形脉宽为9 ms,磁场强度峰值为0～2 T可调。2.动物分组及辐照:健康成年雄性BALB/c小鼠270只（体重19.8±2.2 g）,随机化为假辐照组和5个辐照组（10 m T组、50 m T组、100 m T组、400 m T组和800 m T组）,每组45只,再将每组分为5个时间点,每个时间点9只。选用中强磁场发生器,对各实验组小鼠每天辐照1 h,连续辐照14 d,假辐照组小鼠的处理均同于辐照组,但磁场发生器的磁感应强度为0 m T。3.实验方法:1)连续辐照14 d,期间记录各实验组小鼠体重的变化;2)连续辐照14 d,分别于辐照后1 d、7 d、14 d、28 d和60 d进行取材,剥离双侧睾丸并记录重量,计算睾丸指数;3)剥离双侧附睾,游离精子,光镜下观察和统计精子数量、畸形率和存活率等指标;4)采用苏木精和伊红（hematoxylin and eosin,HE）染色观察小鼠睾丸的形态结构,十字交叉法测量小鼠睾丸生精小管直径。研究结果1.中强磁场辐照对雄性小鼠体重及睾丸指数的影响中强磁场辐照期间,800 m T组小鼠在辐照第4 d后体重开始下降,100 m T组和400 m T组小鼠在辐照第7 d后体重开始下降,辐照第13 d时,与假辐照组相比,高强度辐照组体重明显下降,差别具有统计学意义（P<0.05）。六个实验组小鼠体重在辐照后1 d、7 d、14 d和28 d时,差别具有统计学意义（P<0.05）。与假辐照组相比,100 m T组小鼠在辐照后1 d时体重明显下降,差别具有统计学意义（P<0.05）;400 m T组小鼠在辐照后1 d、7 d和14 d时体重明显下降,差别具有统计学意义（P<0.05）;800 m T组小鼠在辐照后1 d、7 d、14 d和28 d时体重明显下降,差别具有统计学意义（P<0.05）。提示本实验条件下中强磁场辐照可影响雄性小鼠体重增长。六个实验组小鼠睾丸重量在辐照后1 d、7 d、14 d和28 d时,差别具有统计学意义（P<0.05）。与假辐照组相比,100 m T组、400 m T组和800 m T组小鼠在辐照后1 d和7 d时睾丸重量明显下降,差别具有统计学意义（P<0.01）;800 m T组小鼠在辐照后14 d和28 d时睾丸重量仍明显下降,差别具有统计学意义（P<0.05）。六个实验组小鼠睾丸指数在辐照后1 d、7 d、14 d和28 d时,差别具有统计学意义（P<0.01）。与假辐照组相比,100 m T组、400 m T组和800 m T组小鼠在辐照后1 d和7 d时睾丸指数明显降低,差别具有统计学意义（P<0.01）;800 m T组小鼠在辐照后14 d时睾丸指数明显降低,差别具有统计学意义（P<0.01）;各辐照组在辐照后28 d时睾丸指数均明显降低,差别具有统计学意义（P<0.01）。提示本实验条件下中强磁场辐照可影响雄性小鼠睾丸指数。2.中强磁场辐照对雄性小鼠精子质量的影响2.1精子数量检测结果显示:六个实验组小鼠精子数量在辐照后1 d、7 d和14 d时,差别具有统计学意义（P<0.01）。与假辐照组相比,400 m T组和800 m T组小鼠在辐照后1 d、7 d和14 d时精子数量明显减少,差别具有统计学意义（P<0.01）。辐照磁感应强度越大,效应越明显。2.2精子畸形率检测结果显示:六个实验组小鼠精子畸形率在辐照后1 d、7 d和14 d和28 d时,差别具有统计学意义（P<0.05）。与假辐照组相比,100 m T组、400m T组和800 m T组小鼠在辐照后1 d时精子畸形率明显升高,差别具有统计学意义（P<0.05）;800 m T组小鼠在辐照后7 d、14 d和28 d时精子畸形率明显升高,差别具有统计学意义（P<0.01）。辐照磁感应强度越大,效应越明显。2.3精子存活率检测结果显示:六个实验组小鼠精子存活率在辐照后1 d时,差别具有统计学意义（P<0.01）。与假辐照组相比,100 m T组、400 m T组和800 m T组在辐照后1 d时精子存活率明显降低,差别具有统计学意义（P<0.05）。上述结果提示,本实验条件下中强磁场辐照可对雄性小鼠精子质量造成损伤,且磁感应强度越大,效应越明显。3.中强磁场辐照对雄性小鼠睾丸形态结构的影响3.1睾丸组织形态的变化:HE染色结果显示,不同强度辐照组小鼠呈现出不同的睾丸组织形态结构,与假辐照组相比,在辐照后各时间点,10 m T组和50 m T组小鼠睾丸组织形态结构未发生明显异常,生精上皮基底膜完整,生精小管内各级生精细胞排列整齐,管腔内可见成熟精子;在辐照后1 d和7 d时,100 m T组、400 m T组和800 m T组小鼠睾丸组织形态结构逐渐发生异常,生精细胞排列紊乱,界膜轻度增厚,管腔内精子数量减少,出现轻度空化。在辐照后28 d和60 d时,100 m T组、400 m T组和800 m T组小鼠睾丸组织形态结构又趋于正常。3.2生精小管直径的变化:六个实验组小鼠生精小管直径在辐照后1 d和7 d时,差别具有统计学意义（P<0.05）。与假辐照组相比,在辐照后1 d时,400 m T组和800 m T组小鼠生精小管直径缩短,差别具有统计学意义（P<0.05）。在辐照后7 d时,800 m T组小鼠生精小管直径明显缩短,差别具有统计学意义（P<0.05）。上述结果提示,本实验条件下中强磁场辐照可使雄性小鼠睾丸形态结构发生改变,且磁感应强度越大,效应越明显。第二部分中强磁场辐照对雄性小鼠生殖系统影响的机制探讨材料与方法1.辐照装置:同第一部分实验。2.动物分组及辐照:同第一部分实验。3.实验方法:1)采用TUNEL法检测生精小管中细胞凋亡情况;2)采用蛋白质免疫印迹（western blot,WB）法检测小鼠睾丸组织中凋亡相关蛋白（BAX、BCL2和Caspase 3）的表达水平;3)采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA）检测小鼠血清中睾酮（testosterone,T）、促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasing hormone,Gn RH）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）和卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone,FSH）的水平;4)采用ELISA法检测睾丸中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）和谷胱甘肽（glutathione,GSH）的变化。研究结果1.中强磁场辐照对雄性小鼠睾丸细胞凋亡的影响1.1睾丸组织生精细胞凋亡检测结果:TUNEL染色结果经图像分析显示,六个实验组小鼠生精细胞发生凋亡数在辐照后1 d时,差别具有统计学意义（P<0.05）。与假辐照组相比,100 m T组、400 m T组和800 m T组小鼠生精细胞凋亡明显增加,差别具有统计学意义（P<0.05）。1.2睾丸组织凋亡蛋白表达:WB检测结果显示,与假辐照组相比,在辐照后1 d、7 d、14 d、28 d和60 d时,不同强度辐照组小鼠睾丸组织BAX表达水平未见明显变化（P>0.05）;在辐照后1 d时,400 m T组和800 m T组小鼠睾丸组织BCL 2表达水平明显降低（P<0.05）;在辐照后7 d时,50 m T组小鼠睾丸组织Caspase 3表达水平明显增高（P<0.05）,400 m T组和800 m T组小鼠睾丸组织Caspase 3表达水平明显降低（P<0.05）,在辐照后28 d时,400 m T组和800 m T组小鼠睾丸组织Caspase3表达水平明显增高（P<0.05）,在辐照后60 d时,100 m T和400 m T组小鼠睾丸组织中Caspase 3表达水平明显增高（P<0.01）;在辐照后1 d时,800 m T组小鼠睾丸组织BAX/BCL 2比值明显升高（P<0.05）,在辐照后7 d时,400 m T组和800 m T组小鼠睾丸组织BAX/BCL 2比值明显升高（P<0.05）。上述结果提示,中强磁场辐照可增加雄性小鼠睾丸细胞凋亡。2.中强磁场辐照对雄性小鼠血清性激素的影响2.1血清T含量:ELISA检测结果显示,六个实验组小鼠血清T含量在辐照后1d和7 d时,差别具有统计学意义（P<0.05）。与假辐照组相比,在辐照后1 d时,400 m T组和800 m T组小鼠血清T含量明显降低,差别具有统计学意义（P<0.05）;在辐照后7 d时,100 m T组、400 m T组和800 m T组小鼠血清T含量明显降低,差别具有统计学意义（P<0.05）。2.2血清Gn RH含量:ELISA检测结果显示,六个实验组小鼠血清Gn RH含量在辐照后1 d和7 d时,差别具有统计学意义（P<0.05）。与假辐照组相比,在辐照后1 d时,800m T组小鼠血清中Gn RH含量明显升高,差别具有统计学意义（<P0.05）;在辐照后7 d时,400 m T组和800 m T组小鼠血清Gn RH含量明显升高,差别具有统计学意义（P<0.05）。2.3血清LH含量:ELISA检测结果显示,六个实验组小鼠血清LH含量在辐照后7 d和14 d时,差别具有统计学意义（P<0.05）。与假辐照组相比,在辐照后7d时,50 m T组和100 m T组小鼠血清LH含量明显升高,差别具有统计学意义（P<0.05）;800 m T组小鼠血清LH含量明显降低,差别具有统计学意义（P<0.01）。在辐照后14 d时,50 m T组和100 m T组小鼠血清LH含量明显升高,差别具有统计学意义（P<0.05）。2.4血清FSH含量:ELISA检测结果显示,六个实验组小鼠血清FSH含量在辐照后1 d和14 d时,差别具有统计学意义（P<0.01）。与假辐照组相比,在辐照后1d和14 d时,800m T组小鼠血清FSH含量明显下降,差别具有统计学意义（P<0.05）。上述结果提示,中强磁场辐照可影响雄性小鼠血清性激素水平。3.中强磁场辐照对雄性小鼠睾丸组织抗氧化能力的影响3.1 SOD活性:ELISA检测结果显示,六个实验组小鼠睾丸组织SOD活性在辐照后1 d、7 d、14 d和28 d时,差别具有统计学意义（P<0.05）。与假辐照组相比,在辐照后1 d时,400 m T组和800 m T组小鼠睾丸组织SOD活性明显降低,差别具有统计学意义（P<0.05）;在辐照后7 d、14 d和28 d时,800 m T组小鼠睾丸组织SOD活性明显降低,差别具有统计学意义（P<0.05）。3.2 MDA含量:ELISA检测结果显示,六个实验组小鼠睾丸组织MDA含量在辐照后1 d、7 d和14 d时,差别具有统计学意义（P<0.05）。与假辐照组相比,在辐照后1 d时,100 m T组、400 m T组和800 m T组小鼠睾丸组织MDA含量明显升高,差别具有统计学意义（P<0.05）;在辐照后7 d和14 d时,800 m T组小鼠睾丸组织MDA含量明显升高,差别具有统计学意义（P<0.05）。3.3 GSH含量:ELISA检测结果显示,六个实验组小鼠睾丸组织GSH含量在辐照后1 d和7 d时,差别具有统计学意义（P<0.05）。与假辐照组相比,在辐照后1 d时,400 m T组和800 m T组小鼠睾丸组织GSH含量明显降低,差别具有统计学意义（P<0.05）;在辐照后7 d时,800 m T组小鼠睾丸组织GSH含量明显降低,差别具有统计学意义（P<0.05）。上述结果提示,中强磁场辐照可影响雄性小鼠睾丸抗氧化能力。研究结论本实验条件下中强磁场辐照:1.可影响雄性小鼠体重增长,造成睾丸指数下降;2.可降低雄性小鼠精子质量,且辐照磁感应强度越大,效应越明显;3.可造成雄性小鼠睾丸形态结构改变,且辐照磁感应强度越大,效应越明显;4.可诱导雄性小鼠睾丸细胞凋亡;5.这些效应的产生可能与睾丸细胞凋亡增加和血清性激素水平、睾丸抗氧化能力改变有关。
李琰峰[9]（2020）在《基于SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2通路探讨广嗣育麟汤治疗男性不育的疗效及其作用机制的研究》文中认为目的男性不育症已成为目前社会关注的热点问题。西医治疗存在一定的局限性,相当一部分男性不育问题不能得到有效解决;中医治疗具有独特的治疗优势疗效确切,能很好地弥补西医治疗男性不育症的不足;广嗣育麟汤以补肾生精为治疗原则,临床疗效确切,值得进一步深入探讨;本研究通过随机对照试验进一步明确广嗣育麟汤的临床疗效,同时通过动物实验探讨其改善生精功能的机制与SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关性。方法临床研究:采用随机对照试验的方法,阳性对照组采用左卡尼汀治疗,观察组用左卡尼汀联合广嗣育麟汤治疗;疗程为90天;观察在治疗前后患者精液量、液化程度、精子浓度、精子总数、精子总活率、前向运动百分率等精液质量指标以及患者中医症状评分的变化;通过统计分析观察广嗣育麟汤治疗肾虚证男性不育的疗效。实验研究:采用雷公藤多苷诱导建立生精障碍大鼠模型,造模成功后,随机分为空白组、模型组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组12只;空白组和模型组给予去离子水灌胃,对照组给予左卡尼汀口服液灌胃,低、中、高剂量组给予广嗣育麟汤悬混液低、中、高剂量灌胃,共计4周;观察大鼠一般情况、体重、睾丸和附睾脏器系数、精液质量、血清性激素、抑制素B、附睾肉毒碱等指标,以及睾丸组织形态病理改变和超微结构的变,探讨广嗣育麟汤最佳药物治疗浓度。采用免疫组化检测方法检测大鼠睾丸组织Bax、Bcl-2蛋白的含量;采用WB和Real time PCR方法检查SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关蛋白含量及mRNA的表达量;探讨广嗣育麟汤改善生精功能的机制,以及其与SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关性。结果临床研究:治疗后精液质量相关指标观察组明显优于对照组,差异显着（P<0.05或P<0.01）;中医症状总评分以及肾精亏虚证、肾阳虚证、肾阴虚证不同证候评分,观察组也优于对照组,差异显着（P<0.05或P<0.01）;根据临床疗效标准,广嗣育麟汤联合左卡尼汀整体疗效明显优于单纯左卡尼汀治疗疗效,差异有统计学意义（P<0.05）。整个观察期间未出现不良反应报告。实验研究:干预结束后,广嗣育麟汤各剂量组大鼠一般情况、体重、脏器系数、精液质量、抑制素B、附睾肉毒碱等指标检测明显优于模型组,而且中剂量组优于对照组;性激素相关指标中,广嗣育麟汤各组优于模型组,差异有统计学差异（P<0.05）,中剂量组LH和高剂量组T优于对照组;观察睾丸组织病理改变和超微结构可见广嗣育麟汤各组生精细胞形态和数量、线粒体等细胞器数量明显优于模型组和对照组;采用免疫组化检测大鼠睾丸组织Bax、Bcl-2蛋白的含量,可见广嗣育麟汤组Bax含量明显低于对照组,Bcl-2含量以及Bcl-2/Bax 比值均明显高于同对照组;采用WB和Real time PCR方法检查SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关蛋白含量及mRNA的表达量,可见观察组SCF、c-kit、PI3K、AKT、Bcl-2蛋白含量均高于对照组,Bad、Bax蛋白含量均低于对照组;mRNA的表达量SCF、c-kit、AKT、Bcl-2高于对照组,Bad、Bax mRNA的表达量均低于模型组。结论1.广嗣育麟汤可以有效改善男性不育症患者的精液质量,降低肾虚证患者中医症状评分;2.广嗣育麟汤可以有效改善生精障碍模型大鼠一般状态,提高睾丸附睾脏器系数、精液质量、抑制素B和附睾肉毒碱含量,参与下丘脑-垂体-性腺轴性激素的调控,修复睾丸组织及超微结构的形态;3.广嗣育麟汤中剂量为最佳治疗药物浓度;4.广嗣育麟汤可以通过SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路促进生精细胞的增殖和抑制生精细胞的凋亡。综上所述,广嗣育麟汤可以有效治疗肾虚型男性不育症,其调控SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路蛋白和基因是作用机制之一。
殷骏[10]（2019）在《低氧诱导精母细胞凋亡导致精子生成减少的机制》文中研究说明研究背景:高原低张性缺氧（低氧）对男性生殖功能有显着负面影响,其中,精子生成减少是高原男性生殖功能低下的中心环节。精子生成减少的形成是一个复杂的病理生理过程,体内研究表明,在生精细胞中,精母细胞对低氧最为敏感,但是低氧引起体内精母细胞凋亡的机制还不明确。缺氧引起细胞凋亡有两条重要途径:死亡受体凋亡途径和线粒体凋亡途径,这两条凋亡途径在肿瘤中被广泛研究,然而这两条凋亡途径是否参与低氧引起的精母细胞凋亡还不清楚。在体内缺血性缺氧所引起的精子生成减少的疾病模型中,HIF-1α与精索静脉曲张、睾丸扭转、寡精症发生发展密切相关,但是HIF-1α是否参与高原低氧所引起的精母细胞凋亡,以及HIF-1α与两条凋亡途径间的调控机制更无从知晓。巨自噬（简称自噬）开始形成于以Beclin-1连接的自噬起始复合物,复合物相互连接形成双层膜结构,双层膜进一步延长形成闭合环装的自噬小体,自噬小体包裹细胞内破坏的细胞器和损伤的蛋白并与溶酶体融合,最终细胞得以存活。自噬与凋亡是两个紧密联系的病理生理学过程,自噬先于凋亡出现,当外界刺激出现时,自噬出现并抑制凋亡;当外界刺激超过一定限度时,凋亡反过来抑制自噬并正反馈加强凋亡。阐明低氧下精母细胞自噬与凋亡相互作用的分子机制,对于研究低氧引起的精子生成减少有着重要的现实意义。本研究旨在查明低氧引起精母细胞凋亡的内在机制,明确低氧对精母细胞自噬的影响,以及探讨自噬和凋亡在精母细胞中相互作用的分子机制。为防治低氧引起的精子生成减少提供新策略和新靶点。研究方法与内容:1.建立低氧（1%氧浓度）诱导小鼠精母细胞系GC-2凋亡模型,并使用TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡。2.缺氧处理GC-2细胞48h后,酶标法检测LDH含量、Caspase-8含量;WesternBlot法检测DR5、c-FLIP、DcR2、TRAIL、Fas等死亡受体（Death Receptor/DR）凋亡途径相关基因表达,RT-qPCR法检测DR凋亡途径各相关基因mRNA表达。低氧下加入caspase-8特异性抑制剂Z-IETD-FMK,酶标法检测细胞增殖活性。探讨DR凋亡途径在低氧诱导GC-2细胞凋亡模型中的作用。3.低氧结束后,酶标法检测Caspase-3/9含量;JC-1探针法检测线粒体跨膜电位;检测p53、Bcl-2、Bax等线粒体凋亡途径相关基因蛋白表达,RT-qPCR法检测线粒体凋亡途径各相关基因mRNA表达。低氧下特异性抑制caspase-9和同时抑制caspase-8和caspase-9后,酶标法检测细胞增殖活性。探索线粒体凋亡途径在低氧诱导GC-2细胞凋亡模型中的作用。4.低氧条件下转染HIF-1α特异性siRNA,采用流式细胞术检测GC-2凋亡,酶标法检测caspase-3/8/9含量,Western Blot法检测DR5、c-FLIP、DcR2、TRAIL、Fas、p53、Bcl-2、Bax等凋亡途径相关基因蛋白表达;研究HIF-1α在低氧激活DR凋亡途径和线粒体凋亡途径中的作用。5.建立低氧抑制小鼠精母细胞系GC-2自噬模型,并使用mCherry-GFP-LC3B法标记自噬小体与自噬性溶酶体并观察自噬流;流式细胞术检测自噬;Western Blot法检测Beclin-1、ATG5、BNIP-3、VPS34、LC3-II、p62、mTOR、LAMP2、VMA等自噬途径相关基因蛋白表达。6.低氧下转染Caspase-8特异性siRNA,采用酶标法检测GC-2细胞Caspase-3/8含量;mCherry-GFP-LC3B法观察自噬流;Cyto-ID法和吖啶橙法检测自噬;Western Blot法检测caspase-3/8、cleaved caspase-8、Beclin-1、ATG5、BNIP-3、VPS34、LC3-II、p62、mTOR、LAMP2、VMA等蛋白表达。7.低氧下过表达Beclin-1,运用Cyto-ID法检测GC-2细胞自噬;TUNEL法和Annexin V-FITC法检测凋亡;JC-1法检测线粒体跨膜电位;Western Blot法检测DR5、c-FLIP、DcR2、TRAIL、Fas、p53、Bcl-2、Bax蛋白表达。8.睾丸注射Puro-Beclin 1慢病毒,模拟海拔5000米低压低氧暴露30天,建立小鼠精子生成减少模型;HE染色和透射电镜观察生精小管结构变化;TUNEL法检测生精细胞凋亡。研究结果:1.与常氧对照组比较,1%氧暴露24h可诱导GC-2细胞凋亡增加,并且凋亡增加呈时间依赖性。2.低氧处理48h后,GC-2细胞DR5、TRAIL、Fas的mRNA水平和蛋白表达均显着增加,c-FLIP和DcR2的mRNA水平和蛋白表达均显着减少,DcR1的mRNA水平显着下降;LDH和caspase-8含量显着升高;与低氧对照组比较,特异性抑制caspase-8后,细胞增殖活性显着增加。3.低氧处理后,GC-2细胞Bax和p53的mRNA水平和蛋白表达均显着增加,Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达均显着下降;caspase-3/9含量显着增加;线粒体去极化占极化比例显着增加;与低氧对照组比较,特异性抑制caspase-8后,细胞增殖活性显着增加;与常氧对照组比较,同时特异性抑制caspase-8和caspase-9后,细胞增殖活性无显着差异。4.低氧暴露下转染HIF-1α特异性siRNA后,GC-2细胞凋亡和caspase-3/8/9含量显着下降;DR5、TRAIL、Fas、Bax和p53的蛋白表达显着下降,c-FLIP、DcR2和Bcl-2的蛋白表达显着增加。5.与常氧对照组GC-2细胞比较,1%氧暴露24h可抑制自噬,并且自噬呈时间依赖性降低;GC-2细胞Beclin-1、ATG5、BNIP-3、VPS34、LC3-II、LAMP2、VMA蛋白表达显着下降,p62和mTOR的蛋白表达显着增加。6.低氧暴露48h和60h后,转染GC-2细胞caspase-8特异性siRNA,caspase-3/8含量显着下降;GC-2细胞自噬显着增加;Beclin-1、ATG5、BNIP-3、VPS34、LC3-II、LAMP2、VMA蛋白表达显着升高,caspase-8、p62和mTOR的蛋白表达显着降低。7.1%氧暴露48h和60h后,过表达Beclin-1的GC-2细胞自噬显着升高,细胞凋亡显着下降,线粒体去极化占极化比例显着下降;caspase-3/8、cleaved caspase-8、DR5、TRAIL、Fas、Bax和p53的蛋白表达显着下降,c-FLIP、DcR2和Bcl-2的蛋白表达显着增加。8.模拟海拔5000米低压低氧暴露小鼠30天后,Puro-Beclin 1慢病毒转染后的小鼠睾丸中自噬流显着增加,生精小管病损程度减轻,生精细胞凋亡率显着降低。研究结论:1.低氧通过DR凋亡途径和线粒体凋亡途径诱导GC-2细胞凋亡。2.在低氧诱导的GC-2细胞凋亡中,DR凋亡途径和线粒体途径可能是由HIF-1α调控的。3.低氧通过促进caspase-8的活化,抑制GC-2细胞自噬,使低氧诱导的GC-2细胞凋亡进一步增强。4.低氧下过表达Beclin-1可降低线粒体外膜通透和精母细胞凋亡,并且缓解精子生成减少。5.精母细胞中的Beclin-1和caspase-8基因在精子生成减少的形成中发挥重要作用,有望成为治疗精子生成减少的有效靶点。
二、Bcl-2/Bax基因表达对低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Bcl-2/Bax基因表达对低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
（1）基于ROS-MAPK-线粒体途径探讨补肾益精方治疗少弱精子症的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药治疗少弱精子症的临床研究进展 |
| 1 少弱精子症的定义 |
| 2 病因病机 |
| 3 辨证论治 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 氧化应激对男性精子质量的影响及研究进展 |
| 1 精液中氧化应激的产生 |
| 2 氧化应激对精子质量的影响 |
| 3 氧化应激对精子发生的影响 |
| 4 抗氧化应激治疗策略 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 第一部分 基于网络药理学探讨补肾益精方治疗少弱精子症的作用机制 |
| 前言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 补肾益精方对环磷酰胺诱导少弱精子症小鼠模型的作用及抗氧化应激研究 |
| 前目 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 补肾益精方对p38MAPK沉默后TM3细胞凋亡信号的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 补肾益精方对p38MAPK沉默后Sertoli细胞凋亡信号的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 附件：YJD中药成分潜在靶点信息列表（共190个靶点） |
| 中医药科技查新报告书 |
（2）桂药生精胶囊对不育症大鼠睾丸组织Bcl-2/Bax、Caspase-9/3表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物与试剂 |
| 1.3 实验材料与仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 模型制备与分组 |
| 2.2 干预治疗 |
| 2.3 标本采集 |
| 3 检测指标 |
| 3.1 精子参数检测 |
| 3.2 睾丸组织处理 |
| 3.3 苏木精-伊红染色法 |
| 3.4 免疫组织化学染色法 |
| 4 统计学处理 |
| 第二章 实验结果 |
| 1 大鼠睾丸病理学观察 |
| 2 大鼠体质量 |
| 3 大鼠睾丸及附睾质量 |
| 4 大鼠精子参数 |
| 5 大鼠睾丸组织Bcl-2的表达情况 |
| 6 大鼠睾丸组织Bax的表达情况 |
| 7 大鼠睾丸组织Caspase-9的表达情况 |
| 8 大鼠睾丸组织Caspase-3的表达情况 |
| 第三章 讨论 |
| 1 现代医学对不育症的认识 |
| 1.1 病因及发病机制 |
| 1.2 治疗方法 |
| 2 中医对不育症的认识 |
| 2.1 病因病机 |
| 2.2 辨证论治 |
| 2.3 环磷酰胺对中医证候模型的影响 |
| 3 不育症与Bcl-2/Bax、Caspase-9/3信号通路之间的关系探讨 |
| 4 睾丸组织对精子发育的影响 |
| 5 桂药生精胶囊的组成与功效 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 综述 中医药治疗男性不育症的研究近况 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（3）益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型的治疗作用与机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药对少弱精子症的研究进展 |
| 1. 中医药对少弱精子症的认识 |
| 2. 中医病因及辨证分型 |
| 3. 中药复方研究 |
| 参考文献 |
| 综述二 现代医学对少弱精子症的研究进展 |
| 1. 少弱精子症的病因 |
| 2. 睾丸生精细胞增殖分化相关机制 |
| 3. 少弱精子症的西医治疗 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 第一部分 益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的网络药理学预测 |
| 1. 引言 |
| 2. 方法与材料 |
| 2.1 益肾兴阳胶囊活性成分筛选及作用靶点预测 |
| 2.2 益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症PPI网络的构建 |
| 2.3 功能模块分析及作用机制解析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 益肾兴阳胶囊化学成分筛选、作用靶点和疾病靶点预测结果 |
| 3.2 少弱精子症和益肾兴阳胶囊蛋白互作网络构建 |
| 3.3 功能模块分析结果 |
| 3.4 益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的作用机制和有效成分分析 |
| 3.5 益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的活性成分验证 |
| 4. 讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型治疗作用与机制的实验研究 |
| 第一章 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型的实验研究 |
| 第一节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型精子质量影响 |
| 参考文献 |
| 第二节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型精子ATP影响 |
| 参考文献 |
| 第三节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型生精细胞周期影响 |
| 参考文献 |
| 第四节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型睾丸组织生精细胞、支持细胞超微结构影响 |
| 第五节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型睾丸组织PI3K、Akt、SCF、C-Kit、ASK1、JNK、Bcl-2、Bax蛋白表达影响 |
| 参考文献 |
| 第二章 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型的实验研究 |
| 第一节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型精子质量影响 |
| 参考文献 |
| 第二节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型血清性激素影响 |
| 参考文献 |
| 第三节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型精子线粒体膜电位影响 |
| 参考文献 |
| 第四节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型睾丸组织TGF-β1/Smads信号转导通路影响 |
| 参考文献 |
| 第五节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型睾丸组织VDAC2、VDAC3、CHK1、CHK2蛋白表达的影响 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（4）补肾生精法治疗少弱精子症的数据挖掘及其调控生精细胞的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 肾藏精理论及补肾生精法源流探讨 |
| 1 春秋战国秦汉——奠定补肾生精法基础 |
| 2 魏晋隋时期——对补肾生精法的继承创新 |
| 3 唐宋元时期——补肾生精理论趋于完善、系统化 |
| 4 明清时期——补肾生精理论蓬勃发展 |
| 5 总结 |
| 参考文献 |
| 综述二 补肾生精法治疗少弱精子症相关动物实验及细胞实验研究述评 |
| 1 对于少弱精子症动物模型构建 |
| 2 补肾生精法治疗少弱精子症相关体内实验研究 |
| 3 补肾生精法治疗少弱精子症相关体外实验 |
| 4 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 数据挖掘研究 |
| 研究一 基于数据挖掘的李海松教授治疗少弱精子症用药特点与规律 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 研究二 基于中国专利数据库的少弱精子症用药规律挖掘 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 网络药理学研究 |
| 网药研究 基于网络药理学探讨菟丝子枸杞子治疗少弱精子症的作用机制 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 临床研究 |
| 临床研究 广嗣育麟汤治疗肾精亏虚型少弱精子症的临床研究 |
| 前言 |
| 临床资料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五部分 实验研究 |
| 实验研究一 体外实验——菟丝子-枸杞子对GTW诱导精原细胞生精障碍模型的影响及机制探讨 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验研究二 体内实验——菟丝子-枸杞子对GTW诱导少弱精子症模型大鼠生精功能的影响及机制探讨 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在读期间主要研究成果 |
（5）冬虫夏草提取液对60Coγ电离辐照小鼠器官的保护及其机制（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 注释表 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 第一部分 :CSE对电离辐照小鼠脾脏组织损伤的保护作用 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 主要实验器材 |
| 1.4 溶液及试剂的配制 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验动物饲养及分组 |
| 2.2 辐照模型的建立 |
| 2.3 辐照小鼠给药方案 |
| 2.4 小鼠体重检测 |
| 2.5 小鼠脾脏重及脾脏器官指数检测 |
| 2.6 小鼠外周血象检测 |
| 2.7 小鼠脾脏组织形态学检测 |
| 2.8 Western Blot分析小鼠脾脏组织中Bcl-2、Bax、Caspase3、Cleaved-Caspase3 蛋白表达情况 |
| 2.9 CBA流式检测小鼠血清中免疫球蛋白的含量 |
| 2.10 CBA流式检测小鼠血清中炎症因子的含量 |
| 2.11 统计学分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠体重的影响 |
| 3.2 CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠脾脏指数的影响 |
| 3.3 血象学检测CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠外周血细胞的影响 |
| 3.4 HE染色检测CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠脾脏组织病理学的影响 |
| 3.5 MPO染色检测CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠脾脏组织炎性浸润的影响 |
| 3.6 TUNEL染色检测 CSE 对~(60)Coγ射线辐照诱导小鼠脾脏组织凋亡的影响 |
| 3.7 Western blot检测CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠脾脏组织凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.8 CBA流式检测CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠血清中免疫球蛋白水平的影响 |
| 3.9 CBA流式检测CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠血清中炎症因子水平的影响 |
| 4.讨论 |
| 第二部分 CSE对电离辐照诱导的脾脏单核细胞损伤的保护作用 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验药品 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.2.1 脾脏单核细胞培养及相关试剂 |
| 1.2.2 检测细胞分型实验所用试剂 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 溶液及试剂的配制 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 电离辐照小鼠中脾脏单核细胞的分离及活力检测 |
| 2.2 电离辐照小鼠中脾脏单核细胞的分离及CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD19~+细胞比例检测 |
| 2.3 正常小鼠的脾脏单核细胞分离及活力检测 |
| 2.4 电离辐照正常小鼠分离的脾脏单核细胞及细胞活力检测 |
| 2.5 电离辐照正常小鼠分离的脾脏单核细胞及CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD19~+细胞比例检测 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 CCK-8 检测CSE对8Gy~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠中脾脏单核细胞活力的影响 |
| 3.2 流式检测CSE对8Gy~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠中脾脏单核细胞的CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD19~+细胞比例的影响 |
| 3.3 CCK-8 检测CSE对正常小鼠分离的脾脏单核细胞活力的影响 |
| 3.4 CCK-8 检测CSE对4Gy~(60)Coγ 射线辐照诱导脾脏单核细胞后活力的影响 |
| 3.5 流式检测CSE对4Gy~(60)Coγ 射线辐照诱导脾脏单核细胞后CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD19~+细胞的影响 |
| 4.讨论 |
| 第三部分 CSE对电离辐照诱导小鼠睾丸组织损伤的保护作用 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要实验器材 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验动物准备 |
| 2.2 小鼠睾丸组织的收集 |
| 2.3 小鼠睾丸组织MDA含量的检测 |
| 2.4 小鼠睾丸组织SOD活力的检测 |
| 2.5 小鼠睾丸组织形态学检测 |
| 2.6 荧光定量PCR分析小鼠睾丸组织中凋亡基因表达情况 |
| 2.7 Western Blot分析小鼠睾丸组织中Bcl-2、Bax、Caspase3、Cleaved-Caspase3 蛋白表达情况 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠睾丸组织中MDA含量及SOD活力影响 |
| 3.2 HE染色检测CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠睾丸组织病理学的影响 |
| 3.3 MPO染色检测CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠睾丸组织炎性浸润的影响 |
| 3.4 TUNEL染色检测CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠睾丸组织凋亡的影响 |
| 3.5 荧光定量PCR检测CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠睾丸组织中凋亡相关基因表达的影响 |
| 3.6 Western blot检测CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠睾丸组织中凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.7 CSE对~(60)Coγ 射线辐照诱导小鼠脾脏、睾丸组织抗凋亡作用通路示意图 |
| 4.讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简介 |
| 答辩委员会名单 |
（6）补肾生精法治疗少弱精子症及其调控生精细胞增殖与凋亡的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医药诊治男性不育少弱精子症的研究进展 |
| 1 少弱精子症诱因 |
| 2 中医病名 |
| 3 中医病因病机 |
| 4 中医药治疗 |
| 5 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 生精细胞增殖、凋亡相关蛋白及通路的研究进展 |
| 1 精子发生的三个阶段 |
| 2 生精细胞的增殖 |
| 3 生精细胞的凋亡 |
| 4 生精细胞增殖、凋亡相关蛋白 |
| 5 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 菟枸助育汤治疗男性不育少弱精子症的临床研究 |
| 前言 |
| 1 研究对象 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 菟丝子-枸杞子对生精功能障碍SD大鼠生精功能的影响 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 基于SCF/c-kit--PI3K--Bcl-2通路探讨菟丝子-枸杞子调控生精细胞增殖与凋亡的作用机制 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）艾烟干预弱精子症大鼠的细胞凋亡机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 弱精子症的西医研究进展 |
| 1 病因 |
| 2 发病机制 |
| 3 治疗 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 弱精子症的中医研究进展 |
| 1 病因病机 |
| 2 临床研究 |
| 3 机制研究 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 综述三 弱精子症大鼠药物模型的研究进展 |
| 1 奥硝唑溶液灌胃法 |
| 2 雷公藤多苷灌胃法 |
| 3 腺嘌呤灌胃法 |
| 4 环磷酰胺腹腔注射法 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 不同浓度艾烟对弱精子症模型大鼠睾丸指数、精子参数的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验二 不同浓度艾烟对弱精子症模型大鼠睾丸组织病理形态学和凋亡指数的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验三 不同浓度艾烟对弱精子症模型大鼠睾丸组织的Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响和抗细胞凋亡机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分 结语 |
| 1 结论 |
| 2 创新点 |
| 3 不足之处 |
| 4 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（8）中强磁场辐照对雄性小鼠生殖系统的影响及机制探讨（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 1 磁场 |
| 2 中强磁场 |
| 3 磁场的生物学效应 |
| 4 雄性生殖系统的激素调控 |
| 5 磁场对雄性小鼠生殖系统影响的可能机制 |
| 第一部分 中强磁场辐照对雄性小鼠生殖系统的影响 |
| 实验一 中强磁场辐照对雄性小鼠精子质量的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 实验二 中强磁场辐照对雄性小鼠睾丸形态结构的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 中强磁场辐照对雄性小鼠生殖系统影响的机制探讨 |
| 实验一 中强磁场辐照对雄性小鼠睾丸细胞凋亡的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 实验二 中强磁场辐照对雄性小鼠血清性激素的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 实验三 中强磁场辐照对雄性小鼠睾丸组织抗氧化能力的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（9）基于SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2通路探讨广嗣育麟汤治疗男性不育的疗效及其作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 男性不育症中医诊治研究进展 |
| 1 病因病机 |
| 2 辨证分型 |
| 3 辨证论治 |
| 4 总结 |
| 参考文献 |
| 综述二 男性不育症西医诊治研究进展 |
| 1 男性不育症的病因 |
| 2 男性不育症的治疗 |
| 3 生精细胞增殖、凋亡的研究进展 |
| 4 总结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 广嗣育麟汤治疗肾虚型男性不育症的临床研究 |
| 前言 |
| 临床资料 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 广嗣育麟汤对GTW诱导生精障碍模型大鼠生精功能的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 广嗣育麟汤对生精障碍大鼠的SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关蛋白及mRNA表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（10）低氧诱导精母细胞凋亡导致精子生成减少的机制（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 低氧通过HIF-1α介导的死亡受体凋亡途径和线粒体凋亡途径诱导精母细胞凋亡 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 低氧经死亡受体凋亡途径caspase-8 抑制精母细胞巨自噬 |
| 3.1 实验方法 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 过表达Beclin-1 促进精母细胞巨自噬、缓解凋亡,促进精子生成 |
| 4.1 实验方法 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 自噬在精子生成减少中的作用及机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 自噬与细胞死亡的对话 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的研究结果 |
| 致谢 |
四、Bcl-2/Bax基因表达对低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响（论文参考文献）
- [1]基于ROS-MAPK-线粒体途径探讨补肾益精方治疗少弱精子症的作用机制[D]. 曹. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]桂药生精胶囊对不育症大鼠睾丸组织Bcl-2/Bax、Caspase-9/3表达的影响[D]. 梁景辉. 广西中医药大学, 2021(02)
- [3]益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型的治疗作用与机制研究[D]. 常征辉. 北京中医药大学, 2021(02)
- [4]补肾生精法治疗少弱精子症的数据挖掘及其调控生精细胞的机制研究[D]. 王继升. 北京中医药大学, 2021(01)
- [5]冬虫夏草提取液对60Coγ电离辐照小鼠器官的保护及其机制[D]. 魏闪闪. 江西中医药大学, 2020(05)
- [6]补肾生精法治疗少弱精子症及其调控生精细胞增殖与凋亡的研究[D]. 管斯琪. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]艾烟干预弱精子症大鼠的细胞凋亡机制研究[D]. 安雨. 北京中医药大学, 2020(04)
- [8]中强磁场辐照对雄性小鼠生殖系统的影响及机制探讨[D]. 索婷婷. 中国人民解放军空军军医大学, 2020(05)
- [9]基于SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2通路探讨广嗣育麟汤治疗男性不育的疗效及其作用机制的研究[D]. 李琰峰. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]低氧诱导精母细胞凋亡导致精子生成减少的机制[D]. 殷骏. 中国人民解放军陆军军医大学, 2019(03)